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SWU 植保硕博论坛 博士生：袁明龙 * SWU 西南大学植物保护学院 昆虫学及害虫控制工程重点实验室 博士生：袁明龙 指导教师：王进军 教授 柑橘全爪螨微卫星位点的发掘及种群遗传结构研究 植保硕博论坛 科学问题的提出 柑橘全爪螨重要的经济意义 长江上中游柑橘带 赣南湘南桂北柑橘带 浙南闽西粤东柑橘带 鄂西湘西柑橘带 柑橘是世界第一大水果 目前，中国柑橘种植面积和产量均为世界第一 科学问题的提出 柑橘全爪螨重要的经济意义 在影响柑橘生产的诸多因素中，害虫害螨的为害是最为重要的因素之一 柑橘全爪螨在我国及世界各柑橘产区为害最为严重 发生特点 为害周期长(14-24代/年) 难防治(抗药性) 发生范围广(各柑橘产区) 科学问题的提出 柑橘全爪螨重要的经济意义 科学问题的提出 柑橘全爪螨控制面临的困境 化学防治 柑橘全爪螨的控制 农业防治 生物防治 抗药性发展迅速、抗性水平高 体小、世代多、繁殖力强、用药次数多而不合理 农业防治 Agricultural control 生物防治 Biological control 化学防治 Chemical control 生态控制 Ecological control、持续控制Sustainable control和注重生物的IPM Biointensive IPM Stenseth(1987) 指出，解决害虫问题的合理答案必须以害虫遗传学和进化策略的研究为基础，这些方面的研究与害虫的生物学和生态学的研究一样重要 害虫抗药性 农药残留 农产品无公害生产 害虫的种群遗传与进化 Genetic Structure and Evolution of Pest 科学问题的提出 柑橘全爪螨控制面临的困境 科学问题的提出 柑橘全爪螨如此微小的个体，为何对柑橘产业造成如此巨大的损失和威胁？ 柑橘全爪螨对众多杀螨剂快速地产生高水平抗性，其种群遗传有何特点？ 在产雄孤雌生殖的生殖模式下，柑橘全爪螨具有高的遗传多样性吗？若不是，何以高适应性？ 在我国，柑橘全爪螨不同地理种群是否存在显著的种群遗传结构? 种群间的基因交流强度如何? 地理隔离是其种群遗传分化的主要因素吗？ 我国的柑橘全爪螨种群可划分为几大分支? 发掘多态性微卫星位点 柑橘全爪螨不同地理种群遗传结构及其分化机制 柑橘全爪螨种群遗传、进化及分化机制 线粒体DNA（CO ?、12S、cob, etc.） 柑橘全爪螨可持续控制提供遗传学信息 科学问题的提出 核糖体DNA（ITS1 and ITS2） 柑橘全爪螨全线粒体基因组序列测定与分析 第一部分 柑橘全爪螨微卫星位点的发掘 微卫星富集文库构建策略——磁珠富集法 高效 Efficient Traditional Methods 安全 Safe Radioactive Hybridizaton 磁珠富集法是目前国际上应用最为广泛的微卫星位点发掘策略 第一部分 柑橘全爪螨微卫星位点的发掘 磁珠富集法构建微卫星富集文库技术路线 Adaptor ligation Washes-elution PCR amplication Cloning, PCR screen and sequence 1 2 3 4 5 6 7 第一部分 柑橘全爪螨微卫星位点的发掘 Fig.1 Genomic DNA 23 kb 1000 bp 500 bp Fig. 2 PCR products after enzyme-digested DNA fragments are ligated with adaptor High molecular weight DNA was successfully extracted from mites These fragments are about 500 bp, indicating that enzyme digestion and adaptor ligation are successful 第一部分 柑橘全爪螨微卫星位点的发掘 Recovery PCR products of enriched microsatellite DNA 1000 bp 500 bp 1000 bp 500 bp Probe (AC)12 Probe (TC)12 PCR products are continuous smear from 400 bp-1000bp, indicating that enrichments by magnetic beads are successful 第一部分 柑橘全爪螨微卫星位点的发掘 构建的微卫星富集文库 AC-富集文库