BMSCsEPGFPtk细介导HSV1tkGCV系统对A549细胞体外抑制杀伤作用研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 天津医科人学硕+ 天津医科人学硕+学位论文 一、重组质粒的构建及逆转录病毒包装 中文摘要 目的：应用基因工程的方法构建pDON。AI一2 Neo．HSV 1．tk．IRES2．EGFP重组质 粒，将HSVl．tk和EGFP双报告基因转染至小鼠骨髓间充质干细胞中，得到 BMSCs—EGFP．tk细胞；观察其HSVl一tJk基因的表达情况和对肺腺癌A549细胞体外 抑制／杀伤作用，为肺癌基因治疗提供实验依据。 方法：应用PeR扩增技术从质粒pHSVl06d?扩增出HSVl．tk基因，借助pMDl8．T 载体构建重组质粒pHSVl．tt-d18T；以限制性内切酶纠II和国』1分别将重组质粒 pHSVl．tk／18T军I]载体plRES2．EGFP进行双酶切后，用DNA连接酶连接，构建重组 质粒pHSVl一tk—IRES2．EGFP；同样的方法，再以限制性内切酶掣II和铷1分别 将重组质粒pHSVl一tk—IRES2一EGFPfftl逆转录病毒载体pDON—AI．2 Neo双酶切后， 用DNA连接酶连接，构建pDON．．AI．2 Neo—HSVl．tk．IRES2．EGFP重组质粒；并将 逆转录病毒重组质粒进行病毒包装，获得具有感染能力的假病毒颗粒；并分别 以脂质体法和逆转录病毒法瞬时转染／感染小鼠骨髓问充质干细胞，观察不同时 间点，荧光显微镜下增强