第一章说工具酶.pptVIP

连接反应是一个吸能的反应，E.coli 及其它细菌以NAD为能源，动物及噬菌体以ATP为能源 基因工程中常用的DNA连接酶是T4噬菌体DNA连接酶 连接酶的最佳反应温度是37℃，但在这个温度下，粘性末端之间的氢键结合是不稳定的，因此连接反应的温度一般在4~15℃，Tsc DNA连接酶在90 ℃以上高温仍保持活性。 底物DNA ① DNA纯度 蛋白质、苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、 SDS、NaCl等 ② DNA分子构型 切割效率：线性超螺旋质粒环状病毒DNA ③ 识别序列的侧面序列 大多数限制酶对只含有识别序列的寡核苷酸没有催化活性，其序列两端各延长一个或几个核苷酸后才能被有效切割。 ④ 位点偏爱 侧面序列的核苷酸组成与切割效率有关系。如pBR322 DNA上的4个Nae I的识别位点切割效率不同。 底物DNA ⑤ DNA甲基化 dcm和dam甲基化酶 大肠杆菌中的dam甲基化酶在5‘GATC3’序列中的腺嘌呤N6位引入甲基，受其影响的酶有Bcl I、MboI等，但Bam H I、Bgl II、Sau 3A I不受影响 大肠杆菌中的dcm甲基化酶在5‘CCAGG3’或5‘CCTGG3’序列中的胞嘧啶C5位上引入甲基，受其