南农 生物分离没工程 修改生物分离6 凝胶.pptVIP

第六章 凝胶层析 Gel filtration chromatography 对凝胶过滤介质的要求 ①亲水性高，表面惰性，即介质与溶质之间不发生任何化学或物理相互作用； ②稳定性强，在较宽的pH和离子强度范围以及化学试剂中保持稳定，使用寿命长， ③具有一定的孔径分布范围； ④机械强度高，允许较高的操作压力（流速）。 凝胶特性参数 内水体积Vi：孔体积 外水体积Vo：颗粒间体积 柱床体积Vt Vt=Vo+Vi+ Vg Vt′= Vi+Vo 洗脱体积Ve Ve=Vo+KdVi Kd=(Ve-Vo)/Vi 凝胶特性参数 ①排阻极限（exclusion limit） 是指不能扩散到凝胶网络内部的最小分子的相对分子质量。例如Sephadex G50的排阻极限是30 kD。 ②分级范围（fractionation range） 能被凝胶阻滞并且相互之间可以得到分离的溶质的相对分子质量范围。Sephadex G50的分级范围为1.5～30 kD。 ③凝胶粒径 凝胶一般为球形，其粒径大小对分离度有重要影响。粒径越小，分离效率越高。凝胶粒径多用筛目或微米表示。软凝胶粒径较大，一般为50～150 μm（100～200目），例如，Sepharose和Sephadex凝胶粒径分布为45～165 μm 。 硬凝胶粒径较小，一般为5～50 μm 。 ⑤床体积（be