高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）测试盒说明书.PDFVIP

南京建成生物工程研究所 www.njj 高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)测试盒说明书 （货号:A112-1 直接法） 一、 试剂组成及配制(96T): 试剂组成 规 格 保存条件 18mL×1 R 1 瓶 6mL×1 R2 2～8℃避光保存 瓶 粉剂×1 校准品 支 校准品配制：临用前一只粉剂加入200 μL 双蒸水溶解后备用。 附送96孔平底酶标板一块 二、测定原理： LDL 高分子化合物 VLDL      复合体 CM 表面活性剂 HDL      HDL CE 、CO 4 HDL - 胆固醇       胆固醇  H 2 O 2 过氧化物酶 H 2 O 2  4  AAP  Toos   红紫色色素 三、操作过程: 1、样本处理: ①、血清(浆)：直接测定，如超过线性范围用生理盐水稀释后测定。 ②、培养液样本：吸取培养液，1000 转/分，离心10 分钟，取上清测定。 [ ] 100 /mL 注 ：一般建议细胞密度在 万个 以上。 ③、组织样本：准确称取组织重量,按重量(g) ：体积(mL) 1：9 的比例，加入9 倍体积的匀浆介质，冰水浴 条件下机械匀浆，2500 转/分，离心10 分钟，取上清液待测。 [注]:1、如组织样本为非高脂样本，匀浆介质统一用磷酸盐缓冲液(0.1mol/LpH 7.4)或生理盐水进行提取。 2、如组织样本为高脂样本或部分为高脂样本，匀浆介质可统一用无水乙醇进行提取。 ④、细胞样本： A、细胞收集:将制备好的细胞悬液取出，1000 转/分，离心10 分钟，弃上清液，留细胞沉淀；用等渗缓 冲液 （推荐0.1mol/L 、pH7～7.4 磷酸盐缓冲液）清洗 1～2 次，同样 1000 转/分，离心10 分钟，弃 上清液，留细胞沉淀； B、细胞破碎:加入0.2～0.3mL 的匀浆介质 （推荐0.1mol/L、pH7～7.4磷酸盐缓冲液或生理盐水）进行 匀浆，冰水浴条件下超声破碎(功率：300W,3～5 秒/次，间隔30 秒，重复3～5 次)或手动匀浆，制备 好的匀浆液不离心待测。也可采用裂解液裂解(推荐TritonX-100 ，1～2%，裂解30～40 分钟) ，裂解 好的液体不离心直接测定。