任务单元抗抗体的制备.pptVIP

原理：依据抗原抗体的生物学活性进行分离和提纯的技术。将纯化的抗IgG附着于惰性的固相基质上，制成免疫吸附层析柱。当样品流过此柱时，待分离的IgG可选择性地与免疫吸附剂上的特异性配体(抗IgG)结合；当改变洗脱条件可重新解离，将待分离的Ig洗脱下来，达到纯化的目的。 优点：提取纯度高、抗原抗体不失活性。 主要步骤 破碎细胞 蛋白质的去除 核酸的沉淀 酚和氯仿 乙醇 核酸的保存 （1）温度 -70℃ 长期保存 -20℃ 4℃（5℃）最佳和最简单 （2）介质 TE缓冲液（最常用） （1）非共价键解离法 肽链亚单位之间以氢键、静电引力等非共价键结合，这些键结合力较弱，可经2种方法将其断开制备片段。 ①改变pH：蛋白质解离的临界值为pH 3～4(羧基滴定范围)和pH 9～10(赖氨酸—酪氨酸滴定范围)，当加入酸或碱使pH低于，3或高于10时，肽链亚单位就会解离； ②利用强变性剂：多数蛋白在8mol／L脲或6moI儿盐酸胍中会发生变性，使肽链亚单位解离，此法也可用于载脂蛋白抗原的解离和胶原肽的提取。 （2）共价键解离法 二硫键是连接免疫球蛋白肽链的共价键，解离二硫键可将轻链与重链分开。解离的方法多采用氧化法和还原法。氧化法的优点是切开二硫键后，肽链不能重新形成二硫键，便于肽链纯化，缺点是蛋氨酸(甲硫氨酸)被氧化成亚砜，色氨酸侧链