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优秀毕业论文 精品参考文献资料 天津医科大学 硕士学位论文 E2F3、AR、HIF-1α在PC3中的表达及相互关系 姓名：闫凯 申请学位级别：硕士 专业：临床医学；外科学泌尿外 指导教师：吴长利 201105 天津医科大学硕士论文中文摘要 天津医科大学硕士论文 中文摘要 前列腺癌患者占全部男性癌症患者的11％，占全部男性癌症死亡人数的9％。 我国前列腺癌患病率低于西方国家，但是近年来有逐步上升的趋势。引起前列 腺癌的危险因素尚未明确，但是遗传因素是已经被确认的最重要的因素之一。 前列腺癌患者早期可无任何症状，目前诊断主要靠直肠指检，PSA检查，经 直肠B超，前列腺穿刺活检以及影像学的检查，其各项检查都有一定的缺陷， 可能在早期诊断方面有一定的困难，错失治疗的最佳时期，预后不佳，对患者 造成痛苦。 E2F3基因是最近研究比较热门的基因，其表达与前列腺癌的恶性程度有 关，在前列腺癌的发生发展中起促进作用。E2F3通过与pRb及相关蛋白等多 种细胞周期依赖性蛋白及激酶的相互作用来参与细胞周期的调控，对细胞周期 和DNA的复制有重要的调节作用。E2F3是细胞周期调控过程中起核心作用的 转录因子，控制着细胞增殖过程中众多基因的表达，是细胞合成间期中由G1 进入S期所必需的转录因子。E2F3与视网膜母细胞瘤蛋白 (Retinoblastomaprotein，pRB)关系密切，pRB的主要功能就是通过对E2F3的调 节而起生长抑制作用。E2F3的高表达往往提示预后不良。检测E2F3：-白勺表达有 助于前列腺癌的诊治以及恶性程度和预后的判断。E2F3可望成为诊断前列腺癌 和评估预后的指标。 lm灿是生物进化过程中普遍存在的保守的现象，它是由小的、双链的RNA 所激发，通过对靶基因的mRNA的降解所导致的基因转录后沉默。RNAi是一 种非常保守的基因沉默机制。在原始生物中RNAi能够保护基因组免受病毒或 者其它基因片段的插入，并且在生物的发育过程中调节众多基因的表达。 腺相关病毒(adeno．associated Vil21S，AAV)载体是近年来研究最为广泛、最受 关注的基因治疗载体。其具有宿主范围广、免疫原性低、安全性高、稳定性好 等特点，AAv载体被认为是未来基因治疗中最有希望的新一代病毒载体。 目的：探讨AAV转染PC3细胞的效率，通过检测E2F3、AR、HⅢ．1 Q在 PC3中的表达，分析三者在前列腺癌致病中关系，旨在探讨E2F3、AR在前列 腺癌发生发展中的作用，同时比较细胞增殖指标E2F3、AR和HIF．1 a在前列 腺癌中表达的关系。 方法：对PC3细胞进行体外培养，探索细胞生长的最佳条件。用AAV病 毒转染培养的PC3细胞，在荧光显微镜下拍摄转染效果图片。并进行转染率的 计算，探索最佳转染浓度及时间。MTT法探索AAV转染后PC3细胞生长活性， 绘制转染后细胞生长曲线。通过ELISA方法研究E2F3、AR和H球．1 Q在PC3 天津医科大学硕士论文 天津医科大学硕士论文 细胞中表达的相互关系。 结果：AAV可高效转染PC3。AAV与PC3作用60分钟后，1×PBS冲洗2 次，浆细胞培养液37℃过夜，24hr后用荧光显微镜可观察到绿色荧光的表达， AAV转染PC3最佳浓度为1×105 v．g／cell。24h，48h和72h的荧光表达有 增强的趋势(Po．05)。MTT方法检测AAV浓度越高，PC3细胞生长活性越低 (P0．05)。荧光化学发光仪检测E2F3、AR和HIF-1 a三种蛋白在PC3中均有 荧光蛋白表达。三者之间有一定的关系。 结论：AAV可高效转染PC3，并对其生长活性有影响。E2F3、AR、HIF．1 Q在PC3上有一定的相关性。本实验可为后续试验提供参考。 关键词：前列腺癌舢w病毒RNA干扰E2F3 AR HIF．1 Q PC3 ELISA II 天津医科大学硕士论文一 天津医科大学硕士论文 一-————二_——————————————————————————————————————————一 Abstract Prostate cancer patients accounted for 11％of all cancer patients．and of the canc盯deaths 9％．In China,prostate canc．宅r rates are lower than in the western countrjes．but in recent years has gradually rising trend．The cause of prostate CRll∞I h弱nm been dear．But the genetic factor is already confirmed on