抗原与抗体的相互作用及免浩疫学检测.pptVIP

第七章 抗原与抗体的相互作用及免疫学检测 体液免疫的基础是抗原和抗体分子的结合，这种结合可以是游离形式的，也可以结合在细胞表面。 通过抗原抗体的结合继发出各种生理效应，如：溶细胞效应、促吞噬作用、凝集作用、沉淀作用、调节作用等，形成一整套机体体液免疫功能。 抗原决定簇与抗体结合部位的结合，要求分子结构有互补性，也因此具有高度的特异性。 第一节 抗原与抗体反应的特点 一、特异性 抗原与抗体相互结合只局限于一些大分子表面的特定部位，即抗原决定簇和抗体结合位点之间，且以亲和力的作用方式结合在一起。抗原抗体的结合并没有共价键形成，而是由这些特定部位之间的短程分子力相互作用的结果。这些吸引力只有在极短的距离内才有效。因此抗原决定簇与抗体结合位点在空间上必须处于紧密接触状态，才能产生足够的结合力。这种分子间的互补结构决定了抗原抗体结合的专一性。 抗原抗体分子间的作用力，即亲和力包括以下几种： 1、盐键（离子键） 2、范德华力 3、疏水作用 4、氢键 二、抗原与抗体结合的可逆性 抗原抗体的结合反应是一个可逆的反应 Ab+Ag Ab:Ag 由于抗原抗体结合的可逆性，可利用亲和层析法分离纯化抗原或抗体；利用待测抗原和标准抗原与抗体的竞争结合，进行抗原或抗体的定量测定，如放免检测法、酶联免疫吸附法等 三、抗原与抗体反应中量的关系 当抗体与抗原结合时，如果是颗粒抗原，则出现凝集现象；如果是可溶性抗原，则产生沉淀作用。这些可见现象的出现是以抗原与抗体反应特异性和亲和力为基础的，同时也是抗原抗体反应的继发过程。 当抗原与同型抗体相遇时，在合适条件下，不论彼此量的多少，都立即发生特异性的结合形成抗原抗体复合物，这一过程通常只需要几秒的时间便可完成，称为反应的一级阶段。 在一级阶段之后，继发出现抗原与抗体间进一步交联而形成网络状凝集物，进而出现可见的凝集和沉淀，称为反应的二级阶段。这一阶段是抗原抗体网格生长的阶段，速率要慢的多，且在很大程度上依赖于温度、离子强度等外界条件，但更重要的是需要合适的抗原抗体分子比例。只有当二者的结合价彼此饱和时，才能连接成一个大网格样凝集物，出现凝集或沉淀。 抗原抗体凝集（沉淀）反应形成的特点： 1、抗原结合价必须在2价以上； 2、抗体结合价也必须是2价或2价以上； 3、抗原抗体能形成复合物但不一定能形成沉淀； 4、抗原抗体结合形成大分子凝集物的前提是要求其结合价彼此饱和； 5、当抗原大大过量时，只有溶解状态的抗原抗体复合物，而无沉淀出现，在免疫检测中称为前带现象。 第二节 抗血清的制备和抗体的纯化 抗体产生的特异免疫应答是指机体受外源物质刺激后，产生体液免疫和细胞免疫的过程。在这一免疫应答过程中，除依赖于抗原物质有特定的化学结构外，还依赖于动物机体的免疫应答能力。机体免疫应答能力又受遗传因素的控制及机体的生理状况、抗原物质进入机体的途径和佐剂的使用等因素的影响。 由于动物的遗传性不同，同一抗原对不同种动物、同种不同品系甚至不同个体，产生免疫应答的强弱是不同的。因此，在进行动物免疫时，必须选择对该抗原敏感的动物，而且必须是年轻的、健康的。常用的动物有马、羊、兔、鼠和豚鼠。 当抗原初次进入具有应答能力的动物体内后，经过一段较长的潜伏期才出现抗体，又经过一段高峰期后，抗体量逐渐下降直至消失。这段时间总的抗体量是较低的，主要成分是IgM，此为机体对抗原的初次反应。但当抗原再次进入该机体时，血清中抗体很快出现，含量也远高于初次反应，其抗体成分主要是IgG，此为再次反应。 佐剂在抗血清制备中的作用： 由于佐剂有吸附和包埋抗原的“储藏所”作用，延长了抗原在体内的存留时间，便于抗原较长时间的、不间断的刺激机体免疫系统，使初次反应与再次反应结合在一起，其免疫效果更为理想。另外，在佐剂中含有激活巨噬细胞等生理功能的卡介苗类物质，可提高抗原的免疫原性，因此要获得高效价的抗血清，常使用各种类型的佐剂。 动物个体的不同组织部位对抗原刺激的敏感性也是不同的。淋巴结、脾脏、足掌、眼睑结膜等是反应敏感部位，也是免疫动物的常用部位。 一、动物的免疫 1、抗原用量：0.5mg/kg 2、佐剂：弗氏佐剂 弗氏佐剂的成分和使用 3、免疫方法：淋巴结注射、腹部皮下注射、四足掌皮内注射。 4、免疫次数：每隔7-10天免疫一次，共需3-4次。第二次免疫后开始测效价。 二、抗血清制备和抗体效价测定 1、采血方法：兔颈动脉放血、兔心脏取血、兔耳缘静脉放血、鼠心脏取血、剪尾采血、眼窝采血。 2、抗血清制备：血液室温放