免疫组织化学染是色sp技术.pptVIP

免疫组织化学技术的定义;免疫组织化学的应用;实验名称;S-P法原理示意图;免疫组织化学基本实验流程;具体步骤如下： 　1．石蜡切片二甲苯脱蜡，梯度酒精水化，以0.01M PBS（pH 7.4）漂洗3×5min； 　2．所有组织均采用微波修复抗原； 　3．室温冷却后，0.01M PBS（pH 7.4）漂洗3×5min； 　4．滴加50μl过氧化物酶阻断液（试剂A），37℃湿盒孵育 10min； 　5．0.01M PBS（pH 7.4）漂洗3×5min； 　6．滴加非免疫性动物血清（试剂B），37℃湿盒孵育 10min；;　7．甩去多余血清，分别滴加２种抗体，4℃湿盒孵育 过夜，0.01M PBS（pH 7.4）漂洗3×5min； 　8．滴加生物素标记的二抗（试剂C），37℃湿盒孵育 15min，0.01M PBS（pH 7.4）漂洗3×5min； 　9．滴加链亲和素-过氧化物酶溶液（试剂D），37℃湿盒孵育 15min，甩去多余液体； 　10．每片滴加新鲜配制的二甲基联苯胺（DAB）显色液，光镜下控制反应时间（约为1-5min），自来水充分冲洗，??木素复染； 　11．常规脱水、透明、中性树胶封片并镜检分析； 　12．阳性对照采用已知阳性片为标准，阴性对照采用PBS取代第一抗体，其余步骤相同。 ;实验流程中的注意事项;染色前处理 －取材、脱水、浸蜡;染色