抗体纯化工艺中蛋白与配基相不互作用的研究论文.docxVIP

研究生优秀毕业论文 大连理工大学专业学位硕士学位论文摘 大连理工大学专业学位硕士学位论文 摘 要 针对治疗型单克隆抗体纯化工艺中的关键问题，本论文利用表面等离子体共 振(SPR)技术研究了疏水电荷诱导层析(HCIC)配基与抗体蛋白质的相互作 用，对于表面和溶液的多种因素对相互作用的影响进行了考察。 采用自组装技术在金衬底上构建了两种不同密度的HCIC配基表面模型。分 别利用X射线光电子能谱(XPS)、X射线吸收精细结构(NE)乙虹S)、接触角和 表面等离子体共振(SPR)对表面化学与结构、离子化和蛋白质结合进行了考察。 采用SPR技术系统研究配基密度和溶液因素(如盐浓度、pH值)对抗体和白蛋 白吸附的影响。我们的实验结果表明，配基密度对相互作用的热力学和动力学都 有影响。值得注意的是，高配基密度能够提高结合强度，增大吸附速率，降低解 离速率并会导致特异性降低。在中性条件下，疏水作用和氢键作用都对蛋白质吸 附有很大的贡献，而在酸性条件下则会被静电排斥力超过。 此外，本论文通过利用配基对铁磁性纳米颗粒进行修饰构建了新颖的抗体蛋 白分离体系，该体系易于小量、快速分离抗体，对抗体具有一定的特异性吸附能 力。以上抗体．配体相互作用的研究将有力支撑和推动单克隆抗体分离纯化工艺 的优化。 关键词：疏水电荷诱导层析；表面等离子体共振；抗体；配基密度；相互作用 万方数据 抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究Antibody—Ligand 抗体纯化工艺中蛋白与配基相互作用的研究 Antibody—Ligand Interactions in Protein Purification Process Abstract Monoclonal a【1tibodies separation and purification is t11e key issues of the monoclonal antibody production process，this paper describes t11e use of surface plaSmon resonaJlce(SPR)spec仃oscopy to咖dy antibody liga工ld interactions for hydrophobic charge—induction cllromato伊印hy (HCIC)，and its Versa_tilit)， i11 iIlvestigating me surface a11d solution fktors af．fecting the interactions． Two densi够model su矗aces presenting HCIC 1igand(mercamo—etllyl—p妒dine， MEP)were prepared on Au using self aSsembly tecllIlique．The surface chemis姆a11d s仃ucture，ionization a11d proteill bindmg of such model surf．aces were characterized by X．ray photoelec仃on Spec订oscopy(ⅫS)，near-edge X-ray abso印tion fine stmct吡e 州EX：AFS)，contact．an91e titration and SPR，respectiVely．The influences of也e su血ce a11d solution factors，e．g．，liga工ld density，salt concentration锄d solmion pH， on protein adsorption were deteⅡnined by SPR．Our results showed that ligaIld denSi母af|fectS bo也equilibrium and dynamic aspectS of the interactions．Specifically， dense ligalld leads to increaSe in binding s廿engtll，rapid adsoq)tion，slow desorption and low specificity．In addition，bom hydrophobic i11teraction and hydrogen bonding contribute sigIlificantly to the proteill adso印tion at neutral pH，、v：hile me elec仃ostatic repulsion is oven