利用甘油生产都1,3.docxVIP

研究生优秀毕业论文 大连理工大学硕士学位论文摘 大连理工大学硕士学位论文 摘 要 微生物发酵法生产l，3．丙二醇(1，3．PDO)因其绿色环保而备受关注。目前主要利 用单菌发酵生产1，3．PDO，但因其底物耐受性差、产物转化率低、副产物多、产品分离 难及易受噬菌体感染等问题，限制了1，3．PDO的大规模工业化生产。混菌发酵具有多菌 共生酶系互补的优点，但目前主要局限于传统的食品、废水处理和沼气生产等领域，关 于混菌发酵生产1，3．PDO的文献报道较少。针对这些问题，本论文以混菌发酵甘油生产 1，3．PDO为出发点，从大连海域取样筛选理想混菌，对其分离纯化与鉴定，并研究了菌 株的发酵特性。 首先，从大连海域采集藤壶、海藻、海绵和海泥样品40份，以甘油为唯一碳源， 从样品中筛选出16组能代谢甘油的菌株，其中选自海泥的混菌NHN8具有1，3．PDO产 量相对较高、发酵性能稳定的特点。 其次，对筛选的混菌NHN8进行了分离纯化与鉴定，结果显示：混菌NHN8由三 株克雷伯氏杆菌W3、Y1和Y5组成，己保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保 藏号分别为CGMCC NO．10440、10439和10438。 再次，对三株单菌的形态和发酵特性进行了观察和研究。克雷伯氏杆菌W3的菌落 平滑呈乳白色，生长较快，主产物是1，3．PDO，产少量2，3．丁二醇；克雷伯氏杆菌Y1 的菌落含大而单一的气泡，生长比较缓慢，主产物是乙醇；克雷伯氏杆菌Y5的菌落含 小而致密的气泡，生长速度介于W3和Y1之间，主产物是1，3．PDO和乙醇；Y1和Y5 均不产2，3．丁二醇。 最后，研究了甘油浓度和接种比例对混菌发酵的影响，结果显示，混菌具有良好的 底物耐受性，混合发酵的甘油起始浓度为40-2009／L，优选120 g／L。克雷伯氏杆菌W3、 Y1和Y5的接种比例为150--250：10-20：50---100，优选比例为208：17：82。 实验表明，混菌发酵克服了单一菌株底物耐受性差的缺点，提高了生产效率，产物 不含2，3．丁二醇，避免了后期分离中的难题，混菌可耐受甘油浓度达到200 g／L，1，3．PDO 产量达到81．40 g／L。该方法有望为微生物发酵法生产1，3．PDO的工业化提供简单经济的 发酵工艺。 关键词：l，3．PDO；混菌；克雷伯氏杆菌；甘油 万方数据 Screening Screening and fermentation of 1，3-propanediol from glycerol by mixed cultu res of Klebsieila pneumoniae Abstract Microbial fermentation of 1．3-PDO has attracted much attention because of its green production．Up to date，most researches have focused on fermentation optimization of 1，3一PDO using pure culture．However，pure culture has the problems of poor substrate tolerance，low product conversion rate，multi—product，difficult product separation and susceptible to phage infection．which limit the large—scale industrial production of 1,3一PDO． W11ile the mixed fermentation has the advantage of multiple bacterial symbiosis and complementary enzymes．but it iS mostly limited to the traditional areas of food。waste water treatment and biogas production．The literature on mixed fermentation of 1．3．PDO is few．To solve these problems，this paper focused on production of 1,3-PDO from fermentation of glycerol with mixed cultures．Mixed culture was screened from Dalian sea samples，then purification and identi