利用诱导后性nr1条件基因敲除小鼠分析nmda受体在空间记忆提取中的作用.docx

摘 摘 要 利用诱导性NRl条件基因敲除小鼠研究NMDA受 体在空间记忆提取中的作用 专业： 植物学 研究方向： 生物医学 导师： 瞿伟菁教授 博士生： 梅 兵 钱卓教授 摘 要 大量研究表明，海马神经元突触的NMDA受体在空间记忆的信息处理过程 中起着重要的分子开关的作用。长期空间记忆与其它类型的长期记忆一样，可 分为获得、巩固、储存及提取四个阶段，探讨NMDA受体在空间记忆不同阶段 的功能，不仅有助于理解空间记忆的形成过程和分子机制，还将对阐述记忆的 本质等问题有重要启示作用。 药理学和遗传学的证据都揭示海马NMDA受体的活性和NMDA受体依赖 的突触可塑性在动物空间记忆的获得、巩固和储存阶段起着关键作用，在任务 学习之前以及任务记忆的巩固和储存阶段阻断NMDA受体的作用、或敲除 NMDA受体的核心亚基NRl基因，都将妨碍动物空间记忆的形成。但以往的工 作对NMDA受体在记忆提取过程中的作用还少有涉及。 本文将cre／f0冲重组系统与四环素操纵子中的人工转录活化因子tTA结合 起来，即利用诱导性的条件基因敲除技术(第三代基因敲除技术)，构建了在海 马cAl亚区和前脑区特异性敲除NRl基因的小鼠，分别称iCAl一KO小鼠和 jFB—KO小鼠。在这两种小鼠的染色体中，有4个基因位点同时被修饰。通过给 小鼠喂食正常食物或含强力霉素(doxycycline，简称dox)的食物，可达到在时 间上对NRl基因的敲除进行调控，即给小鼠喂食含dox的食物(6m以，下同)5天 后，可获得基因敲除的效果：反之，小鼠体内的NMDA受体活性则不受影响。 通过原位杂交和免疫染色的方法，证实喂食dox 5天后，iCAl．KO小鼠中的NRl 基因敲除限定在海马的CAl区，而iFB—KO小鼠中的NRl基因敲除则限定在前 摘 摘 要 脑区。 分别运用这两种模型小鼠及其同窝对照组进行隐藏平台的水迷宫任务测 试。icAl．KO及其对照组每只小鼠每天训练4次，从水池的不同象限各入水1 次，每次间隔1小时，训练单次的时间设定为90秒，连续实验14天，并于第8 天开始给两组小鼠喂食dox。实验过程的第2天、第7天、第13天和第14天进 行目标测试(pmbe test)。第1天至第13天训练和测试时，水迷宫周围的线索 (cue)完整；第14天测试时只保留部分线索。结果发现，对照组与icAl-KO 组小鼠随着训练时间的增加，逃避潜伏期(1atency)逐渐缩短，分别由第1天 的77．07±2．91秒和75．86±4．53秒降至第12天的26，67±4．02秒和29．2+4．22秒； 且两组小鼠逃避潜伏期的变化趋势一致，没有显著差异。在随后进行的4天目 标测试中，第2天的测试结果显示，两组小鼠分布在水池四个象限中的游动时 间相当，均为25％左右。第7天的测试中，两组小鼠在靶象限中的游动时间均 明显多于其他3个象限(po．001)，分别达到38．48±i．66秒和35．62±1．78秒。 在第13天(喂食dox 5天)、第14天(喂食dox 6天，部分线索存在)的测试 中，两组小鼠在靶象限中的游动时间仍然明显多于其他3个象限(po．001)； 但两组小鼠之间在各象限中的游动时间则没有显著差异。这一结果提示，在海 马cAl亚区特异性敲除NRl基因，无论是在完整线索还是在部分线索的情况 下，小鼠都能正常地对已形成的空间记忆加以提取。 为探讨不同脑区神经元的NMDA受体在空渊记忆提耿中的作用，本文又利 用iFB．KO及其对照组小鼠进行水迷宫任务测试，其结果与icAl一KO及其对照 组小鼠的相似。iFB．KO及其对照组每只小鼠每天训练4次，从水池不同象限各 入水1次，每次间隔1小时，训练单次的时间同样设定为90秒，连续实验16 天，并于第10天开始给两组小鼠喂食dox。实验过程中的第2天、第7天、第 15天和第16天进行目标测试。第1天至第15天调练和测试时，水池周围布置 的线索是完整的，第16天测试时则只保留部分线索。结果发现，随着训练时间 的增加，对照组和iFB．KO组小鼠的逃避潜伏期逐渐缩短，分别由第1天的 68．28±5．28秒和72．49±3．9秒降至第】4天的29．22±6．64秒和27．2±4．27秒；且两 组小鼠逃避潜伏期的变化趋势一致，没有显著差异。在随后进行的4天目标测 试中，第2天的测试数据表明，两组小鼠分布在水池四个象限中的游动时间相 当．均为25％左右。第7天的测试中，两组小鼠在靶象限中的游动时间比在其 他三个象限要多，但没有显著差异(pO．1)。第1 5天(喂食dox 5天)测试中， 两组小鼠在靶象限中的游动时间均明显多于其他3个象限(p0．001)，分别达 摘 摘 要 到35．03±2．03秒和33．65±2．1秒。第16天(喂食dox