第十五章生物技术点与作物育种.pptVIP

母本 X 父本 4、单倍体细胞培养与植物育种 三、植物原生质体培养和体细胞杂交 植物原生质体：指用特殊方法脱去细胞壁的、裸露的、有生活力的原生质团。 （一）原生质体的分离 原则：保证原生质体不受伤害及不损害它的再生能力，先决条件要有一个合适渗透压。 1、分离方法 （1）机械法 （2）酶法 2、影响原生质体分离因素 （1）材料来源 （2）渗透压 （3）酶 （4）分离培养基 （5）培养条件 （6）组织前处理 3、原生质体的收集、纯化和活力测定 （二）原生质体培养 （三）细胞融合（体细胞杂交） 1、融合方法 （1）NaNO3处理诱发融合 （2）高pH-高浓度钙离子处理 （3）PEG处理 （4）电融合 2、融合方式 3、杂种细胞筛选 （1）形态互补 （2）遗传互补 （3）代谢互补 （4）生长互补 4、杂种鉴定 5、细胞融合与作物育种 第二节 转基因技术与作物育种 作物转基因育种：根据育种目标，从供体生物中分离目的基因，经DNA重组与遗传转化或直接运载进入受体作物，经过筛选获得稳定表达的遗传工程体，在经过田间试验与大田选择育成转基因新品种或种质资源。 常规育种技术相比，转基因育种具有很大优势： 1.可以利用的基因资源大大拓宽。 2.为培育优良品种提供了崭新的育种途径。 3.可以对植物的目标性状进行定向变异和定向选择。 4.可以大大提高选择效率，加速育种进程。 （一）作物的转基因技术 1、转基因技术的发展现状 （1）国际转基因植物研究与现状 （2）我国转基因作物研究与利用概况 （二）转基因育种程序 目的基因或DNA的获取 1、目的基因的获得 （1）根据基因表达的产物---蛋白进行基因克隆 分离和纯化控制目的性状的蛋白质或多态，进行氨基酸序列分析; 根据所的氨基酸序列推导相应的核苷酸序列; 采用化学合成的方法合成该基因; 通过相应的功能鉴定来确定所推导的序列是否为目的基因。 （2）从基因组DNA或mRNA序列克隆基因 A、同源序列法和表达序列标签法 同源序列法是根据基因家族成员所编码的蛋白质结构中具有保守氨基酸序列的特点发展的一条快捷克隆即因家族未知成员的新途径，即基于同源序列的候选基因法。 表达序列标签是指能够特异性标记某个基因的部分序列，通常包含了该基因足够的信息区，因而可以和其他基因相区分。目前，表达序列标签主要是通过cDNA的途径获得。 B、根据连锁图谱克隆的基因 C、转座子标签法 D、差异显示法 在生物个体发育的不同阶段或是在不同的组织、空间进行有序表达的方式，叫做基因的差异表达。 差异显示PCR是指通过对来源特定组织类型的总mRNA进行PCR扩增、电泳，并找出待测组织和对照之间的特异扩增条带，该条代就有可能是全长或是部分特异表达的基因，利用这种方法进行基因克隆的方式就是差异显示法基因克隆。 现在又出现了限制性消减杂交（SSH）和RNA任意引物PCR（RAD-PCR）等多种方法。 2、目的基因重组质粒的构建 质粒重组的基本步骤： 从原核生物中获取目的基因的载体并进行改造； 利用限制性内切核酸酶将载体切开，并用连接酶把目的基因连接到载体上，获得DNA重组体。 3、受体材料的选择 （1）良好的植物基因转化系统应具有的条件： 高校稳定的再生能力； 受体材料要有较高的遗传能力； 具有稳定的外植体来源； 对筛选剂敏感。 （2）常用受体材料的类型： 愈伤组织再生系统 直接分化再生系统 原生质体再生系统 胚状体再生系统 生殖细胞再生系统 4、转基因方法的确定和外源基因的转化 （1）.载体介导转移系统 将外源基因重组进入适合的载体系统，通过载体携带将外源基因导入植物细胞并整合在核染色体组中随着核染色体组一起复制和表达。 主要方法有： 叶盘法 真空渗入法 原生质体共培养法 （2）.外源基因直接导入法 这是一种不需要借助载体介导，直接利用理化因素进行外援遗传物质转移的方法。 主要方法有： 化学刺激法 基因枪轰击法(gene gun ) 高压电穿孔法(electroporation) 微注射法(microfibers ) 超声波介导法 脉冲电泳法 离子束介导法 5、转化体的筛选和鉴定 1.转化体的筛选 2.转化体的鉴定 （1）DNA水平的鉴定 （2）转录水平的鉴定 （3）翻译水平的鉴定 二、转基因作物的遗传特点 （一）、外源基因整合机制 1、同源重组整合（homologou