单克隆抗技术.pptVIP

目前治疗性抗体产品：精制破伤风毒素、精制白喉毒素、精制肉毒毒素。 绿脓免疫血浆抗体制剂 ★ 由一个识别一种抗原表位的B细胞克隆产生的同源抗体，称单克隆抗体 盐析沉淀 用中性盐类使蛋白质从溶液中沉淀析出的过程称为蛋白质的盐析作用。 沉淀蛋白质所需盐类浓度视蛋白质种类而异。 常用的有：硫酸铵、硫酸镁、氯化钠 蛋白质是亲水胶体，当加入适量的轻金属盐类时蛋白质分子即处于高渗透压的溶液中，使蛋白质外周水化膜被破坏，同时盐类的离子中和了蛋白质分子的电荷，结果蛋白质的胶体稳定性遭到破坏而沉淀。 但此时蛋白质分子内部的结构没有改变，仍然保持其天然蛋白质的性质，即可复溶解于原来的溶剂中。 （三） 细胞融合 融合过程须注意问题 1、细胞比例：骨髓瘤细胞与脾细胞比例为1：4 2、反应时间：混合细胞的离心管中30s内加入1ml 37℃预温的50％PEG，边加边轻轻摇动离心管，作用90s，然后加入预温的37℃的DMEM不完全培养液终止PEG作用，800r/min离心6min，弃上清。 3、培养液成分 （四）筛选和克隆 有限稀释法(稀释至0.8个细胞/孔) （五） 单克隆抗体的制备和冻存 （六） 单克隆抗体的纯化 （制备方法：体内培养、体外培养） （盐析、凝胶过滤、离子交换层析、 亲和层析、酸沉淀） ★四 、McA制备的基本方法 ★五 、单克隆抗体的应用 1、作为亲合层析的配体