miR19a和miR19对宫颈癌细胞生长的影响及其靶基因的研究.docxVIP

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 【研究目的】微小RNA(microRNA，miRNA)是一类长度约18．26m的小分子非 编码RNA，通过负性调节其靶基因的表达水平参与多种生理、病理过程。近几 年的研究表明，许多miRNA具有癌基因或抑癌基因活性，在肿瘤发生和发展过 程中发挥重要作用。据报道，在人宫颈癌组织中miCroRNA．19a(miR．19a)、 microRNA。19b(miR．19b)是相对高表达的，本研究应用Real．time PCR技术证了 这一结果，然后研究了miR．19a、miR．19b对宫颈癌细胞生长表型的影响，进而 确定miR。19a、miR．19b直接作用的共同靶基因，从而阐明miR．19a、miR．19b 对宫颈癌发生和发展发挥作用的可能分子机制。 【方法】首先应用Real．time PCR技术检测miR．19a、miR-19b在人宫颈癌组织 和癌旁正常组织中的差异表达。然后在人宫颈癌细胞系HeLa细胞中，过表达和 封闭miR．19a、miR．19b，利用WST-1实验、细胞集落形成实验、Trasnwdl实验 等检测细胞生长活性的变化。之后综合利用生物信息学方法筛选出miR．19a、 miR．19b的候选靶基因，并利用荧光报告载体实验验证miR．19a、miR．19b对靶 基因的直接调控作用。通过Real．time PCR和Western blot技术检测宫颈癌细胞 和宫颈癌组织中内源性靶基因mRNA水平和蛋白水平的表达变化，进一步验证 miR．19a、miR．19b对靶基因的调控作用。最后利用RNA干扰技术沉默靶基因， 通过WST-1实验、细胞集落形成实验、Trasnwdl实验等检测细胞生长活性的变 化，进一步研究靶基因的功能。 【结果】Refl．time PCR结果显示miR．19a、miR．19b在人宫颈癌组织中的表达明 显高于癌旁正常组织。在宫颈癌细胞中，过表达miR．19a、miR．19b后细胞增殖 活性，集落形成能力，细胞的侵袭能力均增强；封闭miR．19a、miR．19b后表型正 好相反。靶基因筛选结果表明，胰岛素样生长因子II受体(IGF2R)作为一种抑癌 基因，是miR．19a、miR．19b的共同候选靶基因，其3’非翻译区包含miR．19a、 miR．19b相同的潜在结合位点。荧光报告载体实验表明，miR一19a、miR一19b能 够通过作用于IGF2R基因的3’非翻译区(3’lln缸独sl a_ted re,on，3’UTR)的特定位 点，对其表达进行负性调节。而在miR．19a、miR-19b过表达的宫颈癌细胞中， IGF2R基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平都有明显下降。将IGF2R基因沉 默以后，细胞增殖能力增强，细胞集落形成和侵袭能力也明显增强。 【结论】miR．19a、miR．19b能够促进宫颈癌细胞的增殖，起到癌基因的作用。 天津医科大学硕士学位论文IGF2R基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平都有明显下降。将IGF2R基因沉 天津医科大学硕士学位论文 IGF2R基因的mRNA表达水平和蛋白表达水平都有明显下降。将IGF2R基因沉 默以后，细胞增殖能力增强，细胞集落形成和侵袭能力也明显增强。 【结论】miR．19a、miR．19b能够促进宫颈癌细胞的增殖，起到癌基因的作用。 在宫颈癌细胞中，高表达的miR．19a、miR．19b对抑癌基因IGF2R表达水平的抑 制能力增强，使IGF2R的抑制增殖活性减弱，造成宫颈癌细胞生长速度加快。 通过阐明miR．19a、miR．19b在宫颈癌中的具体作用机制及其靶基因的研究有利 于我们对宫颈癌的发生发展进行深入的理解，同时也为临床上宫颈癌的诊断和 治疗提供一条新的途径。 关键词：microRNA／miRNA miR．1 9a miR．1 9b宫颈癌靶基因IGF2R 天津医科大学硕士学位论文miR-19a 天津医科大学硕士学位论文 miR-19a and miR-19b target IGF2R in cervical carcinoma cells Abstract． 【objective】MicroRNAs(miRNAs)are a class of small non-coding RNAs that include 1 8—26 nucleotides，which post-transcriptionally regulate gene expression． MiRNAs are involved in many physiological and pathological progress．Recent evidence indicates that many miRNA