amiRNA分子设计及其离体合成策略.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１０，３０（９）：９２９７ ａｍｉＲＮＡ分子设计及其离体合成策略 叶梅霞　崔东清　李　昊　王静澄　刘军梅　张志毅　安新民 （北京林业大学林木育种国家工程实验室 林木花卉遗传育种教育部重点实验室 国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室　北京　１０００８３） 摘要　详细介绍了基于 ＷＭＤ３（ＷｅｂＭｉｃｒｏＲＮＡＤｅｓｉｇｎｅｒ３）软件平台的 ａｍｉＲＮＡ（ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ ｍｉｃｒｏＲＮＡ）分子自动设计方法及其离体合成策略。应用网络在线设计时，只需输入目的基因靶序 列相关信息后便可获得候选ａｍｉＲＮＡ。根据选定的最佳ａｍｉＲＮＡ，可得到４条含有ａｍｉＲＮＡ以及载 体中ｍｉＲＮＡ两侧序列的寡聚核苷酸序列。重叠延伸ＰＣＲ合成策略可以以这４条序列以及根据 质粒模板设计的Ａ、Ｂ两段序列作为引物，扩增出目标ａｍｉＲＮＡ。同样尿嘧啶切除的策略也可合成 ａｍｉＲＮＡ，但这些引物序列需做适当调整变动。此外，还介绍了基于特异引物退火的ａｍｉＲＮＡ合成 策略，该策略可保证ａｍｉＲＮＡ分子能够一步ＰＣＲ合成，