实验五-激素发对血糖浓度的影响及血糖浓度的测定.pptVIP

实验五 激素对血糖浓度的影响 及血糖浓度的测定 实验性质：综合性 实验：激素对血糖浓度的影响 --------------- 邻甲苯胺法测血糖 一、目的及要求 1．掌握血糖的测定原理及方法。 2．掌握血糖的正常范围及意义。 3．熟记胰岛素及肾上腺素对血糖浓度的影响 并解释其作用机制。 二、原理: 3H2O 冰乙酸， 沸水浴 1）葡萄糖 5-羟甲基-2-呋喃甲醛 2） 5-羟甲基-2-呋喃甲醛 + 邻甲苯胺 西夫氏碱（蓝绿色） 3）同样处理标准管与样品管 三、试剂：（略） 四、操作步骤： 1、取预先饥饿 14-16 小时的正常家兔 2只， 称重。 2、从耳缘静脉采血：剪毛 → 二甲苯棉球擦 拭 → 干棉球擦干 → 碘酒、酒精消毒 → 7号针头穿刺取血→放入加有抗凝剂（草 酸钠：2mg / ml）的烧杯中→摇匀。 3、1只家兔 肌肉注射胰岛素（ 5U / Kg , 规格： 5U / ml ），另一只家兔 皮下注射 肾上腺 素（0.5 mg / 只，规格： mg / ml ）。 4、30分钟后，分别从耳缘静脉取血或心脏 取血。 5、无蛋白血滤液的制备： 取短试管 4只，各加胰前、胰后、肾前、肾后等抗凝血 0.4 ml，用滤纸擦净粘附于吸管尖端外表面的血液，再加入 5%三氯醋酸 3.6ml，边加边摇，充分混匀。待血液由鲜红色变为暗红色（或酱油色），3000rpm 离心5min，上清即为无蛋白血滤液。 6、取试管 6 支，编号，按下表操作（单位：ml）  各管分别混匀，同时置于100℃水浴加 热8分钟，流水冷却 。630 nm进行比色， 以空白管校正零点，读取各管光密度。 五、计算 血糖(mg％) = O.D测定 / O.D标准 × 0.1 × 1 × 1 / 0.1 × 100 = O.D测定 / O.D标准 × 100 六、注意事项: 1、采血及注射激素时，应尽量使家兔保持安 静。 2、由于血细胞不断从血浆摄取葡萄糖加以利 用，因此, 采血后及时进行检测，否则血 糖浓度将逐渐降低。 3、取血量要准确。 4、无溶血现象及高脂血症时，可以不制备血 滤液，而用血清或血浆直接检测。 5、邻甲苯胺是一种带微黄色的油状液体，久 放后于光线或空气接触易氧化变质；如色 泽变红，最后变棕黑色，此时必须重新蒸 馏提纯。 6、硫脲是抗氧化剂，可使邻甲苯胺试剂稳 定，减低空白管读数，并使反应化合物 呈现纯兰绿色。 七、临床意义： 正常情况下，血糖浓度在各种因素调解下，维持相对恒定；一旦调节发生紊乱，可导致高糖血症或低糖血症。 1、生理或暂时性高血糖： 餐后1～2小时，注射葡萄糖后，情绪紧 张激动时，肾上腺素分泌增多或注射该药 后，可出现暂时性高血糖。 2、病理性高血糖： 多见于胰岛素相对或绝对不足（糖尿病）。其它内分泌系统的疾病，如甲状腺功能亢进、垂体前叶功能亢进（巨人症或肢端肥大症）、肾上腺皮质功能亢进（库欣综合征）、嗜铬细胞瘤、胰岛?-细胞瘤等。 3、生理性低血糖或暂时性低血糖： 见于饥饿或剧烈运动后，注射胰岛素 或口服降糖药后（多见于药物反应或超量 用药）。 4、病理性低血糖： 可见于胰岛细胞瘤引起的胰岛素分泌过多症，严重肝病由于肝的生血糖作用降低而使血糖来源减少，对抗胰岛素的激素分泌不足如垂体、肾上腺皮质或甲状腺功能减退等。 八、思考题： 1、血糖的来源与去路有哪些？ 2、调节血糖的激素主要有哪些？其作用机制 如何？ 3、在实验中应注意哪些问题？ 九、实验报告： 10分 实验报告按医学论文格式书写，包括中文摘要（目