受体相互作用蛋白3与溶酶体通透性改变在大鼠全脑缺血复灌损伤中作用的机制研究-神经病学专知业毕业论文.docx

浙江大学博士学位论文致谢 浙江大学博士学位论文 致谢 时光荏苒，三年半的博士求学生涯即将结束，值此论文付梓之时，衷心的感 谢所有在学--j、工作及生活中关心、帮助和支持我的老师、朋友。 首先，我要深深的感谢我的导师罗本燕教授多年来对我学业上的精心培养和 严格要求!师恩难忘，导师广博的知识、精湛的医术、高尚的医德、严谨求实的 治学态度和不断求索的科学精神，是我一生学习的楷模。 感谢我的师兄汪敬业博士和魏瑞理博士、师姐尹波博士，他们全程参与了我 整个实验的过程，教会我科研思维的方法、动物模型及分子生物学技术。尤其是 汪敬业师兄几乎每天都在关注我实验的进展，及时解答我的疑惑、提出宝贵意见。 感谢浙江大学医学院公共平台朱有法老师和宋兴辉老师，他们在组织形态学 实验中给予我强有力的支持。 感谢何芳萍、杜悦老师和褚克昙博士在科研中对我的帮助和关照，也感谢钱 起、滕海娟、陈毅刚、张利、阮婕、俞越、计仁杰等在我博士求学期间给予我实 验上的帮助，也给我的生活带来了无穷的乐趣。感谢浙江大学医学院生理系夏强 教授，王会平老师和张雄老师。我博士的最后阶段是在夏强教授实验室度过，他 们无私的提供了仪器和技术上的帮助，在生活及学习上亦给予我莫大的鼓励。感 谢浙江大学附属第一医院神经内科全体医生和护士对我学业及生活上的帮助。 感谢皖南医学院的刘海荣博士、浙江大学呼吸病研究所的鲍正强博士、安徽 医科大学的李笑秋博士和张艳召同学，有了他们的支持、鼓励和帮助，使我的实 验取得了顺利的进展。 最后，要感谢我的家人，特别是要感谢我的爷爷奶奶，他们的理解与支持让 我一路前行；我的妻子俞迪靓在我多年的求学生活中也给予了无穷的动力! 向所有曾给予我关心、帮助和支持的人表示衷心的感谢! 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 受体相互作用蛋白3与溶酶体通透性改变 在大鼠全脑缺血／复灌损伤中作用的机制研究 浙江大学医学院 神经病学 博士研究生 徐阳 导 师 罗本燕教授 中文摘要 研究背景： 程序性细胞死亡(Programmed cell death，PCD)在生物生长发育过程和疾病的 发展过程中起着重要的作用。基于形态学和生化改变的特征将PCD分为三种类型： 凋亡、自噬和程序性坏死。细胞凋亡是第一个发现的PCD，根据涉及的信号调控 分子又可分为天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase)依赖和caspase非依赖途 径。大多数的caspase非依赖性细胞死亡途径作用于线粒体，细胞凋亡诱导因子 (Apoptosis inducing factor，AIF)被认为是主要的效应分子。AIF从线粒体释放入 细胞质，然后进入细胞核引起染色质浓缩和溶解。程序性坏死是一种caspase非依 赖性PCD，显示出坏死的形态特征，如核固缩、细胞器肿胀，但是可以由许多分 子控制。受体相互作用蛋白1(Receptor-interactingprotein，RIPl)和受体相互作用 蛋白3(RIP3)形成的复合物(necrosomes)是程序性坏死的关键启动因子。有研究 指出DNA烷化剂诱导的程序性坏死中，AIF也起到重要作用。由此AIF可能是影 响caspase非依赖性凋亡和程序性坏死的共同因素。我们课题组前期研究发现全脑 缺血／复灌损伤诱导的大鼠海马CAl区神经元死亡特点符合程序性坏死而非传统的 凋亡模式。RIP3是程序性坏死的关键调节因子，并且在大鼠全脑缺血／复灌损伤后， 位移进入细胞核发挥引起细胞死亡的作用和。但是RIP3入核后引起神经元程序性 坏死的机制，以及RIP3与AIF的关系尚不明确。 万方数据 浙江大学博士学位论文 浙江大学博士学位论文 中文摘要 此外我们还通过电镜观察到大鼠海马神经元程序性坏死进展过程中存在细胞 器破裂、细胞膜与核膜消失、核固缩。溶酶体膜的完整性受到损坏，使溶酶体水 解酶释放到细胞质中。早期的研究认为溶酶体酶的释放通常导致细胞非程序性坏 死；然而近期的许多研究也提示，溶酶体酶的释放在程序性细胞死亡中也起着关 键作用，这取决于溶酶体膜损伤的程度和释放的水解酶的量。溶酶体膜通透性 (Lysosomal membrane permeability，LMP)改变，但是超微结构没有发生明显的 变化，溶酶体酶向细胞质释放是有限的。根据课题组之前电镜观察的结果，我们 认为程序性坏死的发生发展过程与溶酶体酶的释放存在关联，但缺乏进一步的研 究。组织蛋白酶B(Cathepsin．B)是具有代表性的溶酶体水解酶，在生理和病理过 程中具有重要的作用。严重的氧化应激可以诱导损伤溶酶体膜结构和Cathepsin．B 的泄漏。CA074。me是Cathepsin．B的抑制剂，可以与Cathepsin．B形成复合物抑制 Cathepsin．B的活性。CA074一me