实验一 简没单染色3.pptVIP

微生物学实验 余雪冰 实验一 实验目的 了解光学显微镜的构造并掌握其使用方法，重点掌握油镜的使用方法 掌握简单染色的原理及方法 学习并掌握无菌操作技术 实验原理——显微镜介绍 普通光学显微镜(NIKON) 欧林巴斯（OLYMPUS）生物显微镜 麦克奥林生物显微镜 显微镜的放大倍数和分辨率 1.放大倍数=接物镜放大倍数×接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微镜辨析物体（两端）两点之间距离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间的最短距离。 ?：可见光的波长（平均0.55?m) n: 物镜和被检标本间介质的折射率。 ?：镜口角（即入射角）。 实验原理－油镜使用的原理 油镜，即油浸接物镜。当光线由反光镜通过玻片与镜头之间的空气时，由于空气与玻片的密度不同，使光线受到曲折，发生散射，降低了视野的照明度。若中间的介质是一层油（其折射率与玻片的相近），则几乎不发生折射，增加了视野的进光量，从而使物象更加清晰。 实验原理－染色剂和染色原理 由于微生物细胞含有大量水分（一般在80-90%以上），对光线的吸收和反射与水溶液的差别不大，与周围背景没有明显的明暗差。所以，除了观察活体微生物细胞的运动性和直接计算菌数外，绝大多数情况下都必须经过染色后，才能在显微镜下进行观察。但是，任何一项技术都不是完美无缺的。染色后的微生物标本是死的，在染色过程中微生物的形态与结构均会发生一些变化，不能完全代表其生活细胞的真实情况，染色观察时必须注意。 微生物染色的基本原理，是借助物理和化学因素的作用而进行的。物理因素如：细胞及细胞物质对染料的毛细现象、渗透、吸附作用等。 化学因素如：正负离子之间的相互吸引等。 实验原理－染色剂和染色原理 染色剂 染料按其电离后所带电荷的性质可分为以下类型： 1. 酸性染料：如酸性复红、刚果红、伊红、藻红、苯胺黑等。 2. 碱性染料：一般有碱性复红、中性红、孔雀绿、番红、结晶紫、美兰、甲基紫等，细菌易被碱性染料染色。 3. 中性（复合）染料：如伊红、美兰等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于细胞核染色）。 4. 单纯染色：这类染料的化学亲和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶剂中，如苏丹类（Sudan b)的染料。 实验原理－染色剂和染色原理 球菌 杆菌 杆菌 螺菌 实验材料 器材：显微镜、擦镜纸、吸水纸、载波片、盖玻片、接种环、酒精灯、废液缸、洗瓶等。 细菌形态的染色标本。 菌种： 大肠杆菌（E.coli）、 金黄色葡萄球菌 染色液和试剂：吕氏美蓝、香柏油、二甲苯(或者乙醇乙醚溶液）等- 实验程序－显微镜的使用 1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏油中，细调至看清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯（或者乙醇乙醚溶液）擦去残留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原。 显微镜保养和使用中的注意事项： 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。