胰岛素样生长因子-1基因表达目及临床试验分析.docx

南京医科大学博士学位论文 胰岛素样生长因子一1基因表达及临床试验研究 中文摘要 第一部分利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中高效表达 人胰岛素样生长因子一1(h I GF一1)的研究 目的 利用杆状病毒载体在家蚕幼虫中研制有生物 学活性的可溶性分泌型重组人胰岛素样生长因子一1 (rhI GF一1)。f方法 将1 5kd人I G卜1(hI GF一1)前体 cDNA基因插心家蚕核型多角体病毒(BmNPV)转移载体 pBa kPAK 8中，经与野生型病毒DNA共转染家蚕细胞后， 通过体内同源重组的方式获得重组病毒BmNPV／I GF—l。 以BmNPV／IGF—l感染5龄家蚕幼虫，分别在感染后2 4， 4 8，7 2，9 6，1 O 8，l 2 0h提取家蚕血淋巴液，以ELI SA 法测定不同时相家蚕血中 I G卜1 浓度， 采用 we s t e rn山l o t分析鉴定I GF一1免疫学活性，MTT法观察 其对NI H 3T 3细胞增殖的影响。结果 ELI SA测定显示， BmNPV／I GF_1感染家蚕幼虫后，7 2 h起蚕血中I GF一1浓 度随感染时间延长而逐渐增高(1 9．09“g／m1～2 3．3 6 u g／m1)，1 2 Oh I GF一1含量达到最高值(2 3．3 6 p g／m1)， we s t e rnlb 1 o t分析发现表达产物在蚕体内被加工成 7．5