扩散序谱DOSY测定缓冲体系中蛋白质表观分子量.PDFVIP

波 谱 学 杂 志 第35 卷第3 期 Vol. 35 No. 3 2018 年09 月 Chinese Journal of Magnetic Resonance Sep. 2018 Chinese J Magn Reson, 2018, 35(3): 280-286 doi:10.11938/cjm 扩散序谱 （DOSY ）实验测定缓冲体系中蛋白质表观分子量 1,2 1,3 1,2,3 李红卫 ，袁志良 ，夏 斌 1. 北京大学 北京核磁共振中心，北京 100871；2. 北京大学 化学与分子工程学院，北京 100871；3. 北京大学 生命科学学院，北京 100871 摘 要：液体核磁共振扩散序谱（DOSY ）可以通过测定溶质分子的自扩散系数（D ）来研究该分子在溶液中的表观 t 分子量（M ）．Dt 与测试体系和分子本身性质相关，蛋白质体系较为复杂，从而增加了蛋白质自扩散系数（Dt-protein ） 测定的难度．本文以 3-(三甲基硅基)丙磺酸钠（DSS ）为内标，以蛋白质分子与DSS 自扩散系数的比值（D ）来表征 r 蛋白质分子在溶液中的表观分子量 （Mprotein ），该方法降低了缓冲体系对Mprotein 的影响，使得Mprotein 主要由分子本身 的性质决定．在此基础上，测定了不同分子量蛋白质分子相对于DSS 的D ，拟合得到了D 与M 的相关关系：lgM r r protein protein = 2.6488 lgD  0.7863，相关系数 （R2 ）为0.997 ．最后测定了通过大肠杆菌表达纯化得到的SARS 冠状病毒主蛋白酶 r C 端结构域（Mpro-C ）分子相对于DSS 的D ，并计算出与文献结果一致的M ，进一步验证了拟合公式的准确性和 r protein 实用性． 关键词：液体核磁共振（liquid-state NMR ）；表观分子量；扩散序谱（DOSY ）；缓冲体系；脉冲梯度场 中图分类号：O482.53 文献标识码：A Determination of Apparent Protein Molecular Weight in Solution by Diffusion Ordered NMR Spec