实验二酶的理底物专一性.pptVIP

实验二 酶的底物专一性 实验目的 理解酶的专一性 掌握检查酶专一性的原理和方法 学会排除干扰因素，设计酶学实验 实验内容 本实验以唾液淀粉酶（内含淀粉酶及少量麦芽糖酶）、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的催化作用，观察淀粉酶、蔗糖酶的底物专一性。 酶的专一性是指一种酶只能对一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化作用。酶的专一性程度分为： 键专一性：只要求作用于一定类型的键，对键两端基团无严格要求。如脂酶、核酶 基团专一性：对键两端或一端的基团要求严格，如α-、β-葡萄糖苷酶，转移酶 绝对专一性：只作用于一种底物，如某些核酸工具酶 立体异构专一性：旋光异构专一性和几何异构专一性 实验原理---酶的专一性 淀 粉 直链淀粉: 由200-300个α-葡萄糖以α-1，4糖苷键相连成一直链 支链淀粉:有α-1，4糖苷键和α-1，6糖苷键， 在直链淀粉的基础上形成分支 直链淀粉的相对分子质量比支链淀粉小，直链淀粉的分子是由许多α-D-葡萄糖经过α-1，4-苷键反复连接而成的线状聚合物。 直链淀粉 直链淀粉的形状并不是伸展状态的直链，而是有规律的卷曲成螺旋状，每一螺旋圈约有 6个葡萄糖结构单位。 直链淀粉遇碘液显蓝色，加热煮沸时颜色消失，冷却后又重新显色。这个反应很灵敏，常用来检验淀粉或碘的存在。 支链淀粉比直链淀粉由更多的D-葡萄糖组成，其连接方式也有所不同。支链淀粉中D-葡萄糖之间以α-1，4苷键连接成主链，每隔20－25个葡萄糖单位便分枝出1个支链，支链上还有分枝，而支链的连接点即分枝处为α-l，6糖苷键。 支链淀粉 半缩醛羟基在右边，即与氧环同侧——α-D-葡萄糖； 半缩醛羟基在左边，即与氧环异侧——β-D-葡萄糖。 由α-葡萄糖和β-果糖以α-1，2糖苷键相连而成的双糖 蔗 糖 Benedict反应 Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成氧化亚铜（Cu2O）砖红色沉淀。 淀粉和蔗糖都不能反应，而它们的水解产物葡萄糖能够发生Benedict反应，所以，用颜色反应来观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉及蔗糖的水解作用。 试 剂 淀粉酶溶液：唾液2mL 倒入10mL量筒中（不包括泡沫），用蒸馏水稀释到5mL，静置10分钟后，去掉上层泡沫和下层的沉淀。（自制） 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl） （取前摇匀） 2%蔗糖溶液 Benedict试剂 试 剂 蔗糖酶溶液：干酵母1g置研钵中，加半勺石英沙及蒸馏水少许（约4mL），用力研磨10分钟，转移到50mL离心管中，另用30mL蒸馏水洗涤研钵，并将洗涤液一起转移到离心管中，摇匀，静置5分钟，离心(离心前对称放置的两只离心管要等重配平，精确到0.01g)，小心取出上清液（含蔗糖酶）备用。 （自制） Benedict试剂 在600mL蒸馏水中溶解173g柠檬酸钠和100g无水碳酸钠，冷却后稀释到850mL。 在100mL热蒸馏水中溶解17.4g无水硫酸铜。冷却后稀释到150mL。把硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠－碳酸钠溶液中，边加边搅拌，如产生沉淀。要过滤，班氏试剂配制后能长期使用。如存放较久而产生沉淀时，可取上层清液使用，不必重配。 试管1 试管2 试管3 0.5%淀粉溶液/mL 3 2%蔗糖溶液/mL 3 蒸馏水/mL 3 Benedict试剂/mL 2 2 2 摇匀，沸水煮2分钟 观察记录结果 原因 实验步骤---检查试剂 试管4 试管5 试管6 稀释的唾液淀粉酶/mL 1 1 1 0.5%淀粉溶液/ mL 3 2%蔗糖溶液/ mL 3 蒸馏水/ mL 3 摇匀，37℃保温45分钟 Benedict试剂/ mL 2 2 2 摇匀，沸水煮沸2分钟 观察记录结果 原因 实验步骤---淀粉酶的专一性 实验步骤---蔗糖酶的专一性 试管7 试管8 试管9 蔗糖酶溶液/ mL 1 1 1 0.5%淀粉溶液/ mL 3 2%蔗糖溶液/ mL 3 蒸馏水/ mL 3 摇匀，37℃保温15分钟 Benedict试剂/ mL 2 2 2 摇匀，沸水煮2分钟 观察记录结果 原因 思考题 观察酶的专一性为什么要设计这3组实验？ 每组各有什么意义？ 每组中蒸馏水分别起什么作用？ 将酶煮沸10分钟，重做可能会有什么结果？