蛋白酶的测只定方法.pptVIP

* * 响应面法优化蛋白酶生产工艺（下） 实验内容 1、干物质失重的测定 2、蛋白酶活力的测定 3、数据分析与建模 4、响应曲面作图 5、整改方案分析 一、干物质失重的测定 干重失重＝发酵前干重－发酵后干重 二、蛋白酶活力分析 1、 原理 （1）、福林试剂在碱性情况下极不稳定，可被酚类化合物还原而呈蓝色反应。 （2）、蛋白质分子中含有具有酚基的氨基酸(酪氨酸、色氨酸及苯丙氦酸等)。 （3）、以酪蛋白为底物，同酶液反应，经一定时间后，加三氯醋酸，终止酶反应，并使残余的酪蛋白质沉淀，同水解产物分开，经过滤后取滤液。用碳酸钠碱化，再加入福林试剂使之发色，用分光光度计测定。 （4）、蓝色反应的强弱，同蛋白水解产物的多少成正比而水解产物的量又是同酶活力成正比例关系。因此，根据蓝色反应的强弱就可推测蛋白酶的活力。 2 试剂 1 福林试剂 于2000ml磨口回流装置内加入钨酸钠(Na2WO4·2H2O)100g，钼酸钠(NaMoO4·2H2O)25g，水700ml，85%磷酸50m1，浓盐酸1000ml，文火回流10h．加入硫酸锂(Li2SO4)150g，蒸溜水50m1，混匀取去冷凝器，加入几滴液体溴，再煮沸l5min，以驱逐残溴及除去颜色，溶液应呈黄色而非绿色。若溶液仍有绿色，需再滴加溴液。再煮沸除去之。冷却后，定溶至1000ml。过滤，置于棕色瓶中保存。此溶液使用时加2倍蒸馏水稀释