RNA荧光原位杂交（FISH）试剂盒（石蜡切片）说明书-吉玛.PDF

吉 玛 基 因 股票代码：430601 RNA 荧光原位杂交（FISH ）试剂 盒 （石蜡切片）说明书 如有疑问欢迎垂询 version3.1 上海电话：021 E-mail：support@ 苏州电话：0512 E-mail：szsupport@ 吉 玛 基 因 股票代码：430601 一、 检测原理 RNA 荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization)，简称为RNA FISH ，是一种 重要的非放射性原位杂交技术。它的基本原理是：用已知的荧光素标记单链核酸为探针， 按照碱基互补配对原则，与待检测的 RNA 特异结合，二者经变性-退火-复性，即可形 成靶RNA 与核酸探针的杂交体，随后在荧光显微镜下对待测RNA 进行相对定性、定 量或定位分析。 二、 组分和保存条件 成分 容量（50 tests ） 储存 Buffer C 10 ml 室温 Buffer D 14 ml 室温 Buffer E 8 ml 室温 蛋白酶K 20μl -20 ℃ DEPC 水 6 ml -20 ℃ DAPI 25μl -20 ℃ 注意： 1. Buffer C 母液为20×，用一级纯水 （建议DEPC 水）稀释成2×Buffer C 使用。 2. Buffer D 在通风橱使用。 3. 蛋白酶K 用2×Buffer C 按照1:1000 稀释。 4. 变性液配制：2×Buffer C 400μl ，Buffer D 2800μl ，一级纯水 （建议DEPC 水）定容至4 ml ，每次 新鲜配制。 5. 杂交后水洗液配制：2×Buffer C 400μl ，Buffer D 2000μl，一级纯水 （建议DEPC 水）定容至4 ml ， 每次新鲜配制。 6. 探针应避光稀释并保存，且实验过程中加入探针后的操作应在避光条件下进行。 7. DAPI 工作液：用PBS 按照1:1000 稀释，需避光保存和使用。 8. 实验过程中常用试剂，如二甲苯请您自备。 9. 探针配制方法及保存请参考探针使用报告。 10. 以下操作中的反应时间、温度、Buffer 浓度及用量仅供参考，可根据具体情况优化。 三、 实验方法 1. 脱蜡： 1) 石蜡切片在60ºC 烤箱中预热30 min ； 2) 将切片浸入二甲苯I,II 中各放置10min （建议在染缸中进行）； 3) 在梯度酒精中（100%、95%、90%、80%、70% ）室温孵育各10min （建议在染缸中进 行）； 4) PBS 洗切片两次，每次2min （建议在染缸中进行）。 1 / 3 吉 玛 基 因