高中生物实验中叶绿素的提取和分离相关论述摘要叶绿素的提取和.doc

高中生物实验中叶绿素的提取和分离相关论述 摘要：“叶绿素的提取和分离”实验是高中生物教学中的一个重要实验，同时它涉及到的知识也是高中生物教学中的一个重难点，但由于其操作过程不易把握，所以其在高中实验室开展时存在很多常见问题，同时对于该实验也存在很多新的改进方法，包括对其试验方法、原理等方面的改进。 关键词：叶绿素的提取和分离、存在问题、改进方法 一、该实验的介绍(论述) （一）实验原理 1、叶绿体中的色素是有机物，不溶于水，易溶于丙酮等有机溶剂中，所以用丙酮、乙醇等能提取色素。 2、层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体色素在层析液中的溶解度不同，分子量小的溶解度高，随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢。所以用层析法来分离四种色素。 （二）实验步骤 1、提取色素5克绿叶剪碎，放入研钵，加SiO2、CaCO3和5mL丙酮（或10mL无水乙醇）迅速、充分研磨。（若没有无水乙醇，也可用体积分数为95%的乙醇，但要加入适量的无水碳酸钠，除去水分） 2、收集滤液漏斗基部放一单层尼龙布，研磨倒入漏斗内挤压，将滤液收集到小试管中，用棉花塞塞住试管口。 3、制备滤纸条将干燥的滤纸，顺着纸纹剪成长10cm，宽1cm的纸条，一端剪去二个角，并在距这一端 4、划滤液细线用毛细吸管吸取少量滤液，沿铅笔线划出细、齐、直的一条滤液细线，干后重复三次。 5、纸层析法分离色素 将3mL层析液倒入烧杯中，将滤纸条（划线一端朝下）插入层析液中，用培养皿盖盖上烧杯。 6、过一段时间后观察实验结果，如右图： （三）该实验在高中生物实验的地位 “叶绿素的提取和分离”实验是高中生物教学中一个必做的重要实验，在历年的高中实验会考的“学生实验操作考试”中都有它，同时它也是光和作用教学中一个难度较大的实验，另外关于它的原理、操作过程及相关的一些实验设计在历年的高考题也都会有所涉及。其次该实验是高中生物教材中必修一的内容，它对于学生的实验操作的训练及后续的知识都有一定的作用。 二、高中该试验中常见问题 （一）实验选材不当 对于该实验要求选取材料既含有丰富的色素，同时其中的含水量又要较少，另外还要求其中的色素没有被分解。在教材中选取的材料是菠菜、黑藻，但是在实验选材我们不容易做到这些方面，特别在一些反季节。同时实验材料还要求不能放置太久，所有我们必须及时更换实验材料。而在具体的高中实验中对于实验材料的选取则不是很到位，比如选取一些革质的叶片，一些含叶绿素低的叶片，这些都会影响实验效果。 （二）操作过程不严谨 1、滤液过稀 提取色素液操作时，方法欠妥，滤液黄绿色，浓度稀，实验效果欠佳，只有深绿透明的滤液，才能达到好的分离效果。 （1）所选叶片剪得不碎，加之研磨不充分。实验操作时，尽可能剪碎叶片，可把几张叶片叠放一起，先剪成丝，再一起横着剪碎，这样省时省力。加入少许 SiO2、CaCO3且迅速充分研磨，使研磨液呈匀浆状为好，这样各种色素才能充分溶解在提取液里 ( 丙酮或无水乙醇 )。 （2）加入提取液过多，导致滤液中色素含量低。 （3）过滤时，漏斗基部的脱脂棉太多 ( 或“尼龙布”不是单层 )，色素不易被过滤，或是用过滤纸过滤，导致色素被吸收，降低滤液中色素的浓度。 2、滤液不纯 提取液含有过多的杂质或变质，会严重影响实验结果。 （1）加入过多的二氧化硅和碳酸钙，这样既影响过滤，又使滤液中有颗粒物，降低滤液浓度。 （2）滤液存放时间过长，光线和空气的作用，缓慢的有机反应，将溶解的色素破坏，溶液变为褐色，即叶绿素卟啉环中的镁可被H+或Cu2+所取代。液泡膜破裂流出的鞣酸、草酸等有机酸产生的H+置换了叶绿素中的镁后，可以形成褐色的去镁叶绿素。 3、画滤液线不当 画好滤液线既是实验的难点，又是实验的关键，否则现象不明显 。 （1）滤液线画得不匀实。原人教版教材上讲越细越齐效果越好，极易产生误导，导致学生画的滤液线过浅，线上色素量太少，其实最关键的是画线后绿色较深。实际操作中，每画一次、用电吹风吹干，可重复几次，便于积累色素成分。 （2）滤液线画得距滤纸剪角端太近，易使色素溶解于层析中，不能在滤纸条上向上扩散。 4、滤纸条制备不到位，剪去两角一端没有剪对称，或在使用滤纸条前沾水。 三、实验的改进 （一）实验材料的改进 本节实验教材中选用的是菠菜叶，笔者曾经尝试过用南瓜叶、 萝卜、 菜豆、小叶女贞等叶片，其中以小叶女贞叶片分离效果为最佳；不同地区、不同季节可根据植物特点选用不同叶片，但一般不宜选用含蜡质叶片。 （二）层析液的改进 层析液是一种脂溶性很强的有机溶剂, 教材上给出了两种层析液配方：一种是93号汽油, 另外一种为20份石油醚，2份丙酮，1份苯混合而成。经查资料得下列4种配方供选用： 1、四氯化碳加少许无水硫酸钠； 2、95%的酒精； 3、9 份 95%酒