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第十五讲 抗体的标记 抗体的纯化原理、方法 抗体分子有一定的等电点、溶解度、核电性及疏水性，可以用电泳、盐析沉淀或其他层析技术进行分离、纯化 根据抗体的用途和来源，确定具体的纯化方法 标记抗体选择特异性好的亲和柱进行纯化 抗体的预处理 过滤：去除脂质颗粒、纤维蛋白和固体颗粒 低速离心：去除细胞残渣及小颗粒物质，适用于 血清、腹水和细菌培养上清 二氧化硅吸附：适用含大量脂质的腹水、血清 1.用等量的巴比妥缓冲液稀释腹水或血清 2.加入一定量的二氧化硅粉末，室温搅拌30min 3.2000rpm离心20min，留取上清 抗体纯化－亲和层析法 指在柱材基质上共价连接上配体，利用配体与抗体之间可逆的特异性结合反应，在一定条件下，使抗体被柱子保留，而其余蛋白被洗掉，然后改变条件令抗体被洗脱下来 常用配体：蛋白A、蛋白G或相应抗原 蛋白A亲和层析法 蛋白A是金黄色葡萄球菌的胞壁蛋白，有6个IgG结合位点，5个与Fc片段有很强的结合能力，且各个位点与抗体的结合都是独立的 一个蛋白A至少可以与两个IgG分子结合，适合纯化IgG抗体 蛋白G亲和层析法 蛋白G是G群链球菌的细胞壁蛋白，可与IgG的Fc区域结合 比蛋白A亲和力强，但与白蛋白有微弱结合 适合纯化IgG抗体 抗体的保存 防止细菌或真菌的污染：叠氮钠和柳硫汞 低温存储，忌反复冻融 pH在7～8之间，盐浓度在0～150m