二章基因工程及其在食品科学中应用.pptVIP

第二章 基因工程及其在食品科学中的应用 基因工程基础 基因工程研究方法 基因工程在食品科学中的应用 第一节 基因工程基础 一、基因工程的定义、意义及研究内容 （一）基因工程的定义 gene engineering genetic engineering recombinant DNA technique Molecular cloning （二）基因工程的意义 基因工程是现代生物工程的主体核心技术。基因工程的最大特点是可打破生物种属界限，进行生物种(属、科、目、纲、门、界)内外基因的重组、遗传信息的转移。 遗传病、心脑血管病、糖尿病、癌症过度肥胖综合症、老年痴呆症、骨质疏松症 ① 以属名的第一个字母(大写)和种名的最前两个字母(小写)组成的三字母符号为其基本形式 如：来源于大肠杆菌(Escherichia coli)的酶用Eco表示；来源于流感嗜血菌(Haemophilus influenzae)的用Hin表示 ② 当同属不同种的两种微生物的种名前两个字母完全相同时，则来自后一种微生物的酶的符号改用其种名词头前缀后第一个字母(小写)代替上述三字母符号中的最后一个字母 如：来自Haemophilus parainfluenzae (副流感嗜血杆菌)的用Hpa表示，．而来自同一属的Haemophilus parahaemolyticus (副溶血嗜血杆菌)的则用Hph表示。 ③ 当微生物具有特殊名称时，则将代表该特殊名称的符号置于上述三字母符号之后 如：来自Haemophilus influenzae的Rd株的用Hind表示；来自Haemophilus influenzae的Rf型的用Hinf表示。 ④ 当不止一种限制酶(甲基化酶)分离纯化自同一微生物株系时，则依其被分离的先后顺序以罗马数字(大写)置于上述命名符号之后 如：来自Haemophilus aegytius的三种酶分别用Hae I、HaeⅡ和HaeⅢ表示；来自Haemophilus influenzae的Rd株的三种酶分别用Hind I、HindⅡ和HindⅢ表示。 ⑤ 为了区别起见，在上述命名名称之前加R．表示限制酶类；在上述命名名称之前加M．表示甲基化酶类 如：来自Haemophilus influenzae的Rd株的第三种限制性内切核酸酶为R. HindⅢ，其相应的DNA甲基化酶则为M. HindⅢ。 ④ 限制性片段长度与切割频率 经限制性内切核酸酶切割后产生的DNA片段称为限制性片段(restriction fragment)。一般不同限制酶切割DNA后所形成的限制性片段长度不一 假设在某DNA分子中，A或T出现的频率为X，G或C出现的频率为Y，那么某限制酶在该DNA分子上的切割位点出现频率(切割频率或位点频率) F可用下式表示： F=XnYm 式中：n——该限制酶识别序列中双链A=T碱基对的数目；m——该限制酶识别序列中双链G=C碱基对的数目 1、大肠杆菌DNA聚合酶I(全酶) 来源：大肠杆菌； 分子量：109×103的多肽链 （1）作用 ① 具有5’→3’DNA聚合酶活性，以单链DNA为模板，以带3’自由羟基的DNA片段为引物； ② 5’→3’外切核酸酶活性，从5’端既降解双链DNA，也降解RNA-DNA杂交体中的RNA链(RNA酶H活性)； ③ 3’→5’外切核酸酶活性，底物为带3’自由羟基的双链DNA或单链DNA。 （2）主要用途 ① 以切刻平移法(nick translation)标记DNA。在所有聚合酶中，只有该酶能用于此反应，因为只有其具有5’→3’外切核酸酶活性。 ② 对DNA分子的3’突出尾进行末端标记。 3、T4噬菌体DNA聚合酶 来源：T4噬菌体感染的大肠杆菌 分子量：114×103 （1）作用 ① 5’→3’DNA聚合酶活性，以单链DNA为模板，以带3’自由羟基的DNA片段为引物； ② 3’→5’外切核酸酶活性，底物为带3’自由羟基的双链DNA或单链DNA； （2）主要用途 ① 补平限制酶切割双链DNA产生的3’凹端； ② 如果以标记的dNTP补平双链DNA的3’凹端，那么可对DNA分子进行末端标记； ③ 对DNA分子的3’突出尾进行末端标记，并且该酶为利用此法进行此类末端标记的首选酶； ④ 将双链DNA的突出端转化成平齐端。在制备与合成接头连接的双链DNA时，经常利用这一特性。 4、TaqDNA聚合酶 来源：水生栖热菌(Thermus aq