Application定量PCR之应用基础篇.PDFVIP

Application 定量 PCR 之应用基础篇 1、荧光定量 PCR 的主要概念 1.1 什么是荧光定量 PCR？ 常规 PCR 中，扩增产物（扩增子）是通过终点法来分析检测，即 PCR 反应结束 后，DNA 通过琼脂糖凝胶电泳，然后进行成像分析。而荧光定量 PCR 可以在反应进 行过程中进行累积扩增产物的分析和检测，即“实时”。 相对常规 PCR 而言，荧光定量 PCR 的主要优点是准确地确定初始模板拷贝数和 宽的动态范围内和高的灵敏度。荧光定量 PCR 结果可以用于定性（判断一段序列的有 无），也可以用于定量（确定 DNA 拷贝数），即 qPCR，而常规 PCR 只能做半定 量。 一般而言，荧光扩增曲线可以分成三个阶段：荧光背景信号阶段，荧光信号指数扩 增阶段和平台期。在荧光背景信号阶段，扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖，无 法判断产物量的变化。而在平台期，扩增产物已不再呈指数级的增加，PCR 的终产物 量与起始模板量之间没有线性关系，根据最终的 PCR 产物量也不能计算出起始 DNA 拷贝数。只有在荧光信号指数扩增阶段， PC