九章园艺植物遗传转化载体构建.pptVIP

第五节 目的基因与载体的连接 二、定向克隆法 定义： 将目的基因按正确方向插入载体的方法。 平末端DNA片段连接主要有3种方法： 同聚物加尾法 衔接物连接法 DNA接头连接法 * /Education/LessonsPlantPath/CrownGall/pathbio.htm /Education/LessonsPlantPath/CrownGall/symptom.htm * 第一节 根癌农杆菌Ti质粒基因转化载体的构建 2.SEV系统的构建 构建过程: (1) SEV的受体Ti质粒是pTiB6S3-SE,来自野生型质粒pTiB6S3的突变体. 它的TL-DNA上的致瘤基因(onc)及TR都缺失,T-DNA的保留部分被称为LIH,即左边界内部同源序列.该受体Ti质粒还保留了Vir基因及其他正常的功能基因,同时还携有用于细菌筛选的卡那霉素抗性基因(Kanr). 第一节 根癌农杆菌Ti质粒基因转化载体的构建 (2)SEV中间载体是pMON200. 它含有一个胭脂碱合成酶基因,一个在细菌里编码的壮观霉素抗性基因(Sper),链霉素抗性基因(Strr)及在植物中作选择标记基因的新霉素磷酸转移酶基因(Npt Ⅱ).此外,它还含有一个多克隆位点(MCS),可以方便地插入外源基因.更为重要的是它具有与受体Ti质粒同源的LIH序列及TR.从pMON200衍生出的一个新