igg抗体家的提取及鉴定总结.pptVIP

实验步骤 人血清 提纯物 兔抗人血清 双扩散 电泳 + - * 酶联免疫吸附试验（ELISA）测定IgG * 酶联免疫吸附试验原理 利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗体（抗原）发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时，酶分解底物，生成有颜色的产物。根据颜色的深浅,可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的多少。检测方法有直接法、间接法、双抗体法和抗原竞争法。 * 直接ELISA 间接ELISA 双抗体夹心法 包被(未知抗原） 加入酶标抗体 洗板 加底物 加终止液 包被(已知抗原） 加入待检标本 （未知抗体） 加入酶标第二抗体 ﹙抗抗体﹚ 洗板 加底物 加终止液 包被(已知抗体） 加入待检标本 （未知抗原） 加入酶标抗体 洗板 加底物 加终止液 原理示意图 * 人血清IgG抗体的检测 ——直接ELISA法 测定原理： 将待检标本包被反应板，再加入酶标羊抗人IgG抗体。当标本中存在IgG时，该抗体与包被IgG结合，最后形成IgG-酶标羊抗人IgG抗体复合物，加入底物产生显色反应。 * 包被：用包被缓冲液将纯化抗体稀释至0、2、4、6、8、10mg/L。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml稀释液，4℃过夜。