分子诊断学复习资料--简答题部分.docxVIP

简答 基因组的特点：？（大题） 人类基因组的特点： 1、人类基因组具有23对染色体，基因组序列大约2.9亿个核苷酸，含有蛋白质编码基因大约20, 000-25, 000个。其中大量基因与中枢神经系统，特别是脑部发育相关； 2、绝大多数基因为断裂基因，且分布不均（每条染色体具有基因富集区和基因稀疏区）。除蛋白质编码基因外，其他大量基因为RNA编码基因； 3、基因内和基因附近中存在大量短序列调控元件，发挥基因的调控表达和协调表达的作用； 4、基因组（基因内）中存在大量功能未知的其他序列（“非编码DNA”），如串联重复序列、转座元件。 5、序列突变是人类基因突变的重要来源，序列/基因多态性是研究人类遗传突变的重要手段。 6、线粒体DNA（mtDNA）是人类母系遗传疾病的重要来源基础。 真核基因组特点： 1. 真核基因组结构庞大：人：3×109bp。几、十、百倍于原核。 2.线性双链DNA，多条染色体和二倍体（Diploid）：DNA和组蛋白质形成染色体，存在于核膜内。人：23对，46条； 3.单顺反子(Monocistron) ：一个结构基因转录生成一条mRNA。 4. 功能基因不连续性，内含子与外显子并存（断裂基因）：转录后需剪接(Splicing) 5. 非编码区多于编码序列(9:1) 6.含有大量重复序列（Repetitive Sequences): 重复次数可达数百万次，序列多态性是真核生物基因组的重要特征。 原核生物基因组的特点： 基因组呈共价闭合环状双链状态，散布在细胞中，有时相对集中形成类核/拟核（Nucleoid） 基因组DNA小，基因数目少（1500-5900个），种间DNA大小差异大，GC含量差异大(菌种鉴定和分类标准），基因多为单拷贝基因（编码rRNA 、tRNA基因多拷贝，利于核糖体的快速组装和蛋白质合成） 基因组只有一个复制起始点，功能相关的基因大多成簇地串联排列（操纵子结构）在染色体上，结构基因无内含子，基因连续分布，为多顺反子。 除主基因组外，原核生物往往还具有质粒基因组 转座元件/基因是原核生物基因组的重要特征（转座元件（Tranposable Element）是指可移动的基因成分，即能在一段DNA分子内部或两段DNA分子之间移动的DNA片段，又称跳跃基因。） 致病基因是致病原核生物基因的重要特征 病毒基因组的特点： 基因组大小相差很大（HBV：3.2kb，痘病毒：300kb） 结构分子具有多样性（DNA病毒/RNA病毒，单链DNA/RNA病毒，双链DNA/RNA病毒，环状分子/线性分子） 基因组多数是连续性（单一分子基因组），但RNA病毒往往不连续 （呼肠孤病毒：10条节段双链RNA，甲乙流感病毒：8条单链节段RNA，丙型流感病毒：7段单链节段RNA 。包装在同一个病毒颗粒内，或在不同病毒颗粒内，只有全部基因组序列都存在，才具备感染能力） 编码序列占基因组的90%以上，间隔区序列很少； 多为单拷贝（单倍体），即每个基因只出现一次（除逆转录病毒基因组有两个拷贝）； 相关基因丛集（功能上相关的基因排列在一起）、有重叠基因和不规则基因结构序列。 1、试述点突变（基因背景清楚和未知）的主要检测方法。 答：对基因背景清楚或部分清楚的点突变，可以采取直接检测基因点突变的方法，如等位基因特异性寡核苷酸杂交(allele specific oligonucleotide，ASO)、PCR-ELISA、等位基因特异性扩增(allele specific amplification，ASA)、PCR-RFLP、基因芯片技术等进行诊断，例如β地中海贫血，可以使用ASO、PCR-RFLP 联合基因芯片技术进行诊断。对于一些基因背景未知的点突变，可以采用单链构象多态性(single-strand conformational polymorphism，SSCP)、变性梯度凝胶电泳(denaturing graient gel electrophoresis，DEEG)、异源双链分析(heteroduplex analysis，HA)、DNA序列测定、蛋白截短测试（protein truncation test，PTT）等方法，如Hopkins大学医学院的研究人员设计了47 对PCR引物，分段扩增血友病A因子Ⅷ 基因片段，进行DGGE分析，发现多态性片段后再进行DNA序列分析，几乎查清了所有临床轻中度病人的点突变。 2、试述限制性内切酶MstⅡ切割法诊断镰状细胞贫血的原理并图示。 答：在FⅧ基因区域内，有一种A基因存在三个拷贝，其功能不详，其中一个A基因位于FⅧ基因的第22 号内含子内(A1)，另外两个位于X染色体的末端(A2、A3)。A1基因可以与其上游的两个A基因拷贝中的一个发生同源重组，引起FⅧ基因的1-22