免疫共沉淀应用-碧云天.PDF

碧云天免疫共沉淀技术服务 Co-Immunoprecipitation by Beyotime 碧云天生物技术/Beyotime Biotechnology 订购热线：400-168-3301或800-8283301 技术咨询：info@ 技术服务：service@ 碧云天网站 微信公众号 网址： 碧云天免疫共沉淀技术服务 概述  免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation，Co-IP)技术是以抗原、抗体间的特 异性免疫反应为基础，研究蛋白质间相互作用的经典方法。  与其它研究蛋白质相互作用的方法相比，免疫共沉淀是在生理条件下检测蛋 白质间相互作用，因此，不仅可以检测到体内形成的天然复合体，而且可排 除过表达靶蛋白所带来的假阳性；由于内源性的靶蛋白是完全加工、修饰成 熟的蛋白质，所以依赖于修饰的蛋白质间相互作用也可以被检测到。  免疫共沉淀可分为细胞内过表达蛋白、细胞内源性蛋白、组织内蛋白的免疫 共沉淀。 2 | Presentation Title | Presenter Name | Date | Subject | Business Use Only 碧云天免疫共沉淀技术服务 原理  免疫共沉淀技术原理是以细胞内源性靶蛋白(protein X) 为诱饵 ，将 protein X的抗体与细胞总蛋白进行共孵育，促进免疫复合物的形成；随后 加入能够与抗体Fc段结合的protein A/G(预先结合固化在琼脂糖微珠上) ， 这样在protein X所在的环境中与其有相互作用的蛋白(protein Y)会被一起 沉淀下来，形成 “结合蛋白-靶蛋白-靶蛋白抗体-protein A/G微珠”复合 物，纯化该复合物后凝胶电泳分离蛋白，应用Western blot 或者质谱技术 鉴定靶蛋白的结合蛋白。 Fc Agarose Protein beads A/G Protein X Protein Y 碧云天免疫共沉淀技术原理示意图 3 | Presentation Title | Presenter Name | Date | Subject | Business Use Only 碧云天免疫共沉淀技术服务 技术特点  优点  相互作用的蛋白质都是经翻译后修饰的，处于天然状态；  蛋白的相互作用是在自然状态下进行的，可以避免人为的影响；  可以分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。  缺点  可能检测不到低亲和力或瞬间的蛋白质-蛋白质相互作用；  两种蛋白质的结合可能不是直接结合，而是有第三者在中间起桥梁作用；  如用Western blot检验，必须在实验前预测目的蛋白是什么，以选择最 后检测的抗体，若预测不正确，实验就得不到结果。 4 | Presentation Title | Presenter Name | Date | Subject | Business Use Only 碧云天免疫共沉淀技术服务 应用  免疫共沉淀应用  动植物生理活动研究  分子生物学研究  物种及微生物鉴定  寻找新的相互作用蛋白  验证目的蛋白和待测蛋白是否具有相互作用 5 | Presentation Title | Presenter