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- 2018-12-28 发布于福建
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真核基因组d让na的分离纯化
真核基因组DNA的分离纯化 核酸包括DNA、RNA两种分子,在细胞中都以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子,原核生物的染色体DNA、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子;有些噬菌体DNA为单链环状分子; 大多数生物体内RNA分子均为单链线性分子并具有不同的结构特点,如真核生物mRNA分子多数在3'端带有polyA结构。 分离纯化核酸总的原则: ①应保证核酸一级结构的完整性(完整的一级结构是保证核酸结构与功能研究的最基本要求); ②排除蛋白质、脂类、糖类等其他分子的污染 。 ③无其他核酸分子的污染(如抽提DNA分子时应去除RNA分子)。 分离核酸 应注意以下几点: ①减少化学因素对核酸的降解, ②减少物理因素对核酸的降解: ③防止核酸的生物降解: 进行核酸分离时最好新鲜生物组织或细胞样品,若不能马上进行提取,应将材料贮存于液氮中或-70℃冰箱中。 核酸提取的主要步骤: 一般为破碎细胞,去除与核酸结合的蛋白质以及多糖、脂类等生物大分子,去除其他不需要的核酸分子,沉淀核酸以去除盐、有机溶剂等杂质,最后得到纯化的核酸。 一、外周血白细胞DNA提取(NaI法) 【实验目的】 掌握NaI法提取外周血白细胞DNA的原理和方法。 【实验原理】 从全血制备白细胞DNA,可用双蒸水溶胀红细胞及白细胞膜,释放出血红蛋白及
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