细胞生上物学提要.ppt

细胞生物学 学习提要 “细胞学说”的基本内容 ? 认为细胞是有机体，一切动植物都是由细胞 发育而来,并由细胞和细胞产物所构成； ? 每个细胞作为一个相对独立的单位，既有它“自己的”生命,又对机体整体的生命有所助益； ? 新的细胞只能通过细胞分裂产生。 细胞是生命活动的基本单位 ?细胞是构成有机体的基本单位 ?细胞具有独立的、有序的自控代谢体系， 细胞是代谢与功能的基本单位 ?细胞是有机体生长与发育的基础 ?细胞是遗传的基本单位，细胞具有遗传的全能性 没有细胞就没有完整的生命 细胞的基本共性 ◆由脂——蛋白体系的生物膜； ?DNA－RNA遗传装置； ?蛋白质合成的机器——核糖体 ?一分为二的方式进行分裂 原 核 细 胞(prokaryotic cell) ?最基本的特点： ① 基因组——遗传信息量小，一个环状DNA ② 细胞内没有膜相结构，没有专门的细胞器和细胞核； 主要代表： ?支原体（mycoplast）——最小最简单的细胞； ?细菌 ?蓝藻（又称蓝细菌）（Cyanobacteria） 最小、最简单的细胞——支原体 支原体（mycoplast）0.1～0.3μm，仅为细菌的十分之一 具有细胞的特征： 能在培养基上生长 具有典型的细胞膜 一个环状的DNA mRNA和核糖体 一分为二的分裂繁殖方式 原核细胞与真核细胞的主要差异 植物细胞与动物细胞的比较 ?细胞壁 ?液泡 ?叶绿体 细胞形态结构的观察方法 光学显微镜技术（LM） 电子显微镜技术 ( EM)：TEM＆SEM 扫描遂道显微镜 (STM) 几种显微镜观察样品大小的范围 普通复式光学显微镜技术 分辨率(D)是指区分开两个质点间的最小距离 决定LM分辨率的三要素 物镜镜口角（α） 入射光波长（λ） 界质折射率（N） 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） 荧光显微镜的应用 不同的荧光染料激发后可发出不同的荧光，可用不同的荧光剂对同一标本染色，使细胞的不同成分呈现不同的颜色； 在光镜水平用于特异蛋白质的定性和定位；如绿色荧光蛋白(GFP)的应用 光学显微镜与电子显微镜的基本区别 主要电镜制样技术 超薄切片技术 用于电镜观察的基本样本制备 负染色技术 染色背景，衬托出样品的精细结构 冰冻蚀刻技术 冰冻断裂与蚀刻复型： 主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒和膜表面结构 快速冷冻深度蚀刻技术（quick freeze deep etching） 电镜三维重构技术：电子显微术、电子衍射与计算机图象处理相结合 扫描电镜 样品处理 ① CO 2临界点干燥法防止引起样品变形的表面张力 ② 喷镀一层金膜——表面良好的导电性。 扫描隧道显微镜 STM （scanning tunnel microscope） 原理：量子力学中的“隧道效应”。其关键部件是一个加上一定电压的精密探针。探针接近物质时，因“隧道效应”而飞出电子，从而产生电流；当表面原子凸凹不平，使探针与物质表面间的距离不断发生改变，电流因而随之变化。 扫描隧道显微镜 特点 分辨本领高，（横向分辨率为0.1～0.2nm， 纵分辨率可达0.001nm）； 可在真空、大气、液体等多种条件下工作； 非破坏性测量。 用途 可直接观察生物大分子的原子布阵和一些生物结构的原子排列。纳米生物学研究领域中的重要工具 。 差速离心  特点 介质密度均一；速度由低向高，逐级离心。 沉降顺序 核→线粒体→溶酶体与过氧化物酶体→内质网与高基体→核蛋白体。 用途 分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯度离心再行分离纯化。 密度梯度离心 速度沉降 等密度沉降 特点 介质密度高，陡度大，介质最高密度大于被分离组分的最大密度。 力场比速率沉降法大10~100倍，需要高速或超速离心。 原理 样品各成分在连续梯度的介质中经过一定时间的离心则沉降到与自身密度相等的介质处，并停留在那里达到平衡，从而将不同密度的成分分离。 流式细胞仪 细胞分散并对待测成分进行特异染色； 悬滴中的细胞一个一个依次通过检测器； 检测器可测定每个细胞中待测成分的含量； 不同表面标记的细胞所带电荷情况不同产生不同偏转，实现细胞的分选。 基本概念① 原代培养（primary cult