细胞化学染色2对009-2-25.pptVIP

　第二节　细胞化学染色 (cytochemical stain) 临床检验与输血学系　胡嘉波 概述 细胞化学 (组织化学，组化)染色以形态学为基础并结合化学或生物化学技术，对细胞内各种化学成分、代谢产物作定位、定性和半定量检查的一门科学。可弥补单纯细胞形态学检查识别的不足。 细胞化学染色临床意义: 1.辅助判断急性白血病的类型。仅从细胞形态学观察白血病的诊断正确率约50～70%，如结合细胞化学染色则可提到90%以上。 2.辅助血液系统等疾病的诊断和鉴别诊断。 不同细胞化学染色，染色步骤不同，但基本步骤为固定、有色沉淀反应及复染。 1.固定 为了保持细胞结构及化学成分的不变，需对细胞进行固定。根据染色的成分不同，选择合适的固定液，使细胞内的蛋白质、酶类、糖类等变成不溶性物质。固定的方法有物理法和化学法，临床上常用的是化学法固定。物理法包括干燥和火焰固定；化学法包括蒸汽固定和液体固定，如甲醛、乙醇、甲醇、丙酮等。 2. 有色沉淀反应 通过不同化学反应，使被检测的化学物质最终形成稳定的有色沉淀。列举以下三种化学反应： （1）偶氮偶联法：含萘酚的底物，在相应酶的作用下释放出萘酚，萘酚与重氮盐（如坚牢蓝紫酱GBC、坚牢蓝B、六偶氮付品红等）结合，偶氮偶联形成有色沉淀。如NAP染色、特异性酯酶染色、非特异性酯酶染色、ACP染色等。 （2）普鲁士蓝反应：铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成如亚铁氰化铁蓝色沉淀，如铁染色。 （3）雪夫反应: 过碘酸氧化细胞内糖类中的乙二醇基形成乙二醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀物，如过碘酸-雪夫反应。 3.复染 目的在于使各种细胞能显示出来便于观察。选择复染液的颜色应与有色沉淀的颜色有明显的对比度，即能使细胞结构显示又能清楚地看出细胞化学染色结果。如铁染色复染常用中性红，过碘酸-雪夫反应常用甲基绿。对核着色效果较好的有中性红、甲基绿、苏木精、核固红、沙黄等，使浆着色较好的有伊红、刚果红、光绿等。 一、过氧化物酶染色（POX） 【原理】 粒细胞和单核细胞的胞浆中含有髓过氧化物酶（myeloperoxidase, MPO）,能将底物H2O2分解，产生新生态氧，它能够将四甲基联苯胺氧化为联苯胺蓝。联苯胺蓝自我脱氢氧化，则显棕色四甲基苯醌二胺。若加入亚硝基铁氰化钠与联苯胺蓝结合，可形成稳定的蓝色颗粒，定位于细胞浆酶所在部位。 骨髓片POX染色 骨髓片POX染色 正常血细胞的染色反应 过氧化物酶主要存在于粒细胞和单核细胞中。原粒大多呈阴性反应，部分可出现少量阳性颗粒。自早幼粒细胞起至成熟中性粒细胞均呈阳性反应，并随着细胞的发育成熟阳性反应程度逐渐递增，中性分叶核粒细胞呈强阳性反应。 淋巴细胞、幼红细胞、巨核等均呈阴性反应。 POX染色临床意义 主要有助于急性白血病类型的鉴别 （1）急粒其白血病性原粒细胞可呈弱阳性反应，颗粒粗大，呈局灶性分布；急淋其原淋细胞和幼淋均呈阴性反应；急单时白血病性原单呈阴性反应或弱阳性反应，颗粒细小，呈弥散分布。 （2）急单与恶性组织细胞白血病鉴别：异常组织细胞 POX染色呈阴性反应，急单白血病细胞呈弱阳性反应。 二、苏丹黑B染色 【原理】 苏丹黑B（Sudan black B，SBB）是一种脂溶性重氮染料，能溶解细胞内的含脂结构（如中性脂肪、磷脂、糖脂和类固醇）中，而使脂类物质显示出来，呈棕黑色或深黑色。脂类物质在粒细胞中丰富，单核细胞中也有少量。 【正常血细胞的染色反应】 结果与POX染色基本一致。 【临床意义】 本染色临床意义与POX染色基本相似。 【方法评价】过氧化物酶染色要求涂片新鲜，保持酶活性，才能得出正确结果，而苏丹黑B染色则无此要求。虽然SB染色临床意义基本同POX染色 ，但其灵敏度及特异性两者有所不同。SB染色的特异性低于POX染色，POX阳性见于髓系细胞，而SB阳性也可见于淋系细胞；但SB染色的敏感性高于POX染色，例如急性粒细胞白血病POX染色阴性的患者，其SB染色可阳性。 三、中性粒细胞NAP染色 【原理】 中性粒细胞胞浆中的碱性磷酸酶能水解磷酸萘酚钠，释放出萘酚，后者与重氮盐偶联形成不溶性的有色沉淀定位于酶活性处。 中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP） NAP积分 油镜下计数100个中性杆状核、分叶核粒细胞，分别记录其分级情况，全部阳性细胞之和即为阳性率。将得出各种积分的百分率乘以该积分数，再相加即为积分值。 例：4分 占20％ 4 x 20=80分 3分 占40％ 3 x 40=120分 2分 占18％ 2 x 18=36分 1分 占10％ 1 x 10=10分