免疫共沉淀原理及注时意事项.pptVIP

免疫共沉淀 （Co-Immunoprecipitation， Co-IP） 一 实验原理 以（抗体和抗原）之间的专一性作用为基础的用于研究（蛋白质相互作用）的经典方法。是确定两种蛋白质在完整（细胞内生理性）相互作用的有效方法。 如果用蛋白质X的抗体免疫沉淀X，那么与X在体内结合的蛋白质Y也能沉淀下来。 CO-IP应用与IP区别 测定两种目标蛋白质是否在体内结合 确定一种特定蛋白质的新的作用搭档 CO-IP与IP只取决于检测焦点是初级靶分子（抗原）还是次级靶分子（相互作用蛋白） 实验基本原理 1.提取蛋白 2.在细胞裂解液中加入抗X的抗体 3.孵育后再加入Protein A或G(于Agarose bead上) 若细胞中有与兴趣蛋白结合的目的蛋白，就可以形成复合物：“Y—X—抗X抗体—Protein A或G 3.经变性、聚丙烯酰胺凝胶电泳，复合物又被分开。（xy抗原、x抗体） CO-IP原理图解 proteinA/G-琼脂糖珠复合物 Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质，能特异性地与人和哺乳动物抗体（主要是IgG）的Fc区结合。 目前多用protein A/G预先结合在argarose beads上。 ProteinA/G的作用及具体原理 “捕获”抗体，形成复合物， 抗体-目的蛋白