课题酵母细胞的呢固定化.pptVIP

湖南长郡卫星远程学校 2009年上学期 制作 03 课题3 酵母细胞的固定化 阅读课题背景，说出酶应用过程中的问题与设想？ 一 基础知识 （一） 固定化酶的应用实例 （1）高果糖浆的生产原理： 葡萄糖异构酶 果糖 葡萄糖 ——生产高果糖浆 (2)葡萄糖异构酶固定：　　 (3)高果糖浆的生产操作： 　　将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体上，装入反应柱中。 从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续使用半年。 （二）固定化细胞技术 1.将酶或细胞固定化的方法 将细胞（或酶）包埋在细微网格里 将酶（或细胞）相互连接起来 将酶（或细胞）吸附在载体表面上 包埋法 化学结合法 吸附法 〖思考〗将谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸的发酵过程变为连续的酶反应，应当固定（酶、细胞）；若将蛋白质变成氨基酸，应当固定（酶、细胞）。 √ √ 2. 固定化细胞的材料： 固定化细胞时应当选用不溶于水的 多孔性载体材料，如明胶、琼脂糖、海藻酸钠、醋酸纤维素和聚丙烯酰胺等 　　让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。 1. 制备固定化酵母细胞 （1）酵母细胞的活化： 1g干酵母＋10mL蒸馏水→50mL烧杯→搅拌均匀→放置1h，使之活化。 二 实验操作 （2）配制CaCl2溶液： 0.83gCaCl2＋150mL蒸馏水 →200mL烧杯→溶解备用。 防止海藻酸钠焦糊 （3）配制海藻酸钠溶液： 0.7g海藻酸＋10mL水→50mL烧杯→酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化→蒸馏水定容到10mL。 (4)海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合： 　　将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。 防止高温杀死酵母细胞 （5）固定化酵母细胞： 　　以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中，形成凝胶珠状颗粒。 原理？ 2.用固定化酵母细胞发酵 （6）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗2～3次。 （7）发酵：150mL10％葡萄糖＋固定化酵母细胞→200mL锥形瓶→密封→25℃发酵24h。 发酵过程中锥形瓶为什么要密封？ 锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形成的？ 在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？ 酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。 酵母菌进行无氧呼吸产生的。 需要。 例1．下列有关固定化技术的叙述，正确的是（ ） A. 固定化酶只是在细胞内才能发挥作用 B. 固定化酶能提高酶的利用率 C. 酶的固定是酶分离纯化的常用方法 D.固定化酶的固定化方式就是吸附在固体表面上 √ 例2. 关于固定化细胞的叙述，正确的是（ ） A. 催化效率高，低耗能、低污染 B. 对环境的条件非常敏感，容易失活 C. 既能与反应物充分接触，又能与产物分离 D. 成本低、操作简单，但反应效果可能很低 √ 例3．固定化酶的优点是 A．有利于增加酶的活性 B．有利于产物的纯化 C．有利于提高反应速度 D．有利于酶发挥作用 √ 例4．下列不是用于包埋法固定化细胞的载体是 A．琼脂糖 B．醋酸纤维素 C．聚丙烯酰胺 D．聚乙烯树脂 √ 湖南长郡卫星远程学校 2009年上学期 制作 03