快速测定β-内酰胺类抗生素高.PDFVIP

快速测定β-内酰胺类抗生素高 分子聚合物方法的研究和建立 (天津市药品检验所 袁雯玮)  前言：  1. 抗菌药物是临床最常用的基本药物。 同时也是临床上较易发生不良反应的药 物。常见的临床不良反应为过敏反应。 经研究证明，β- 内酰胺类抗生素所引 起的速发性过敏反应，是与药物中存在 的高分子杂质有关。故控制该类药物的 高分子聚合物对临床应用安全性是具有 重要的意义。  国内关于β-内酰胺类抗生素高分 子杂质的研究工作是于70年代开始，经 历了近40年的研究，于2000年版药典正 式在4个品种8个药品标准中收载了高分 子聚合物检查。  2005年版药典扩大到11个品种的21 个药品标准中均有高分子聚合物检查。  但在2005年版药典 β- 内酰胺类抗生 素品种进行高分子杂质检查时，由于该 方法的分析周期较长，加之在执行过程 中，涉及到较多生产厂与检验部门，工 作量大幅度增加。于是仪器设置能力不 足等矛盾较为突出。  为此作为该课题工作的参与者，觉得 有必要对原方法进行改进，使药典中收 载的方法，尽可能适应当前国内生产厂 及检验部门常规检验的要求。  1. 快速测定方法研究  2005年版药典提到的11个品种21个药品标准 中高分子聚合物的检查方法均是以sephadex G10 作为色谱柱的凝胶色谱模式。  考虑到原药典收载的方法在原理，系统适用性 试验，以及方法验证专属性、重现性、准确性等 方面均符合规定要求，而只是完成检品的分析周 期过长。  因此在研究建立新的方法时，我 们仍采用凝胶色谱的分离模式，并采 用原方法中的自身对照外标法进行高 分子聚合物的测定。  在上述二个基本条件不变的情况下 进行方法学的改进,完善。  2.1 色谱柱的改进：  拟采用直径较细，内径为1cm,长 为30cm的玻璃柱作为色谱柱。  以sephadex G10为填充剂，由于 柱内径的缩小，柱床体积随之也变 小。 Kav=0也降低。  2.2 系统适用性试验：  色谱柱的理论板数、分离度等系统 适用性参数是保证高分子聚合物与单体 的分离的必需条件。原药典方法规定了 用蓝色葡聚糖2000溶液在A、B两个流动 相中流出时间作为对高分子聚合物的定 位。  根据实验经验知，色谱柱的理论板数 在本方法中仅作为一参考数值，而关键 是高分子聚合物与单体间的分离度。  凝胶色谱模式是属于分子排阻色谱 法。在2005年版药典二部附录VH分子排 阻色谱法项下, 2.系统适用性试验中 规定：  色谱柱的理论板数（n ）、分离度 (R)、重复性、拖尾因子的测定方法。 在一般情况下，用高效液相色谱法项下 的方法。  但在高分子杂质检查时，某些药物分子 单体与高聚物不能达到基线分离时，其 分离度计算公式为：  R=二聚体的峰高/单体与二聚体 之间的谷高  ( 分离度应大于2.0）  原药典中高分子聚合物测定方法均未 规定分离度的要求，在快速测定法研究时， 我们考虑拟规定分离度。  但样品中的高聚物量极少，由于高分子 聚合物的对照品不易获得，故不能直接用 样品与聚合物对照品配制分离度试验用溶 液.  根据本方法的分离原理，拟加入一 定量的蓝色葡聚糖2000，制成含一定浓 度蓝色葡聚糖2000的样品溶液来进行分 离度试验。  2.3 供试品溶液浓度与进样量的确定：  供