第四章基因工程载体.ppt

利用质粒载体将真核生物基因转入大肠杆菌中进行表达,该质粒载体应具备哪些元件? 1）普通载体元件 复制起始点ORI、 选择标记、 多克隆位点MCS 2）大肠杆菌操纵子元件 阻遏基因 I 操纵基因O 启动基因P 核糖体结合位点序列（SD） 转录终止信号区。 4、TA克隆载体 原理：Taq酶特点 研制出了一种线形质粒，其3 ’端各带一个不配对脱氧胸腺嘧啶核苷（T），采用该质粒可将PCR产物以TA连接的方式直接进行克隆，即TA克隆。用于TA克隆的载体被称为TA克隆载体。 环化的质粒克隆载体  TA克隆载体姜颖等人于2000年提出了一般质粒克隆载体改造成TA克隆载体的方法。 Sup4 基因编码赭色抑制tRNATYR(酪氨酸)，抑制赭色表型 (成为白色)。不含外源DNA片段的YAC载体转化酵母菌，转化子的菌落呈白色。插入的外源DNA片段的YAC重组载体，其Sup4已经失活，结果转化酵母菌后所产生的转化子形成赭色菌落。 ?噬菌体和其DNA DNA上有至少61个基因，有一半是必须的，与自身的活动有关，成簇排列。 其他约1/3是非必须基因（位于尾部合成至阻遏蛋白基因之间的区段）。 2. ?噬菌体的基因组特点 ? genome(48502bp) ?噬菌体感染细菌的早