biochemistrybrna的生物合成个和加工.pptVIP

采用足迹法确定启动子的位置和序列 试验方法： 使DNA与RNA聚合酶结合，再用核酸内切酶处理（1）； 未与RNA聚合酶结合的DNA，同相同的核酸内切酶处理（2）； 电泳，对比（1）和（2）电泳条带； （2）条带＞（1）条带 根据缺失条带所处的位置，确定与RNA聚合酶结合的DNA片段 足迹法试验证明 DNA模板对应于RNA的第1个核苷酸为+1； 注意，没有0； 其下游，即转录区记为正数； 其上游，记为负数。 酶对启动子的识别是转录的第一步 大肠杆菌启动子：在转录开始位置的上游10个和35个核苷酸位置有两段DNA的序列比较保守，分别称为－10序列（－10 sequence）和－35序列（－35 sequence）。 -35区的序列与起始点辨认有关，称为辨认位点 -10区的序列称为Pribnow盒(box) ，结合位点 酶与模板的辨认结合 启动区共有序列——保守序列或一致性序列 Pribnow框盒（Pribnow box） 从起点上游约-10处找到6bp的保守序列TATAAT，称为-10序列或Pribnow框（box），与真核细胞和古生菌中的TATA Box功能相似。 A.T较丰富，易于解链。 功能: (1)RNA pol (RNA 聚合酶)紧密结合; (2)形成开放启动复合体； (3)使RNA pol定向转录。 Promoter(启动序列或启动子)： RNA聚合酶含有两个结合NTP的部位 起始部位：优先结合嘌呤核苷酸ATP/GTP 延伸部位： (2)真核生物的转录起始 顺式作用元件(cis-acting element) -35区　 5 ′-TATA Hogness盒 TATA盒 -40～-110区　CAAT盒　　GC盒 反式作用因子(trans-acting factor) 转录因子（ＴＦ） 转录因子和真核生物的转录起始复合物 ＴＦⅡ Ａ、Ｂ、Ｄ、Ｅ、Ｆ　 起始前复合物（ＰＩＣ） PIC 依赖ρ因子的转录终止（弱终止子） ρ因子是6聚体，具有依赖性RNA-DNA解旋酶和ATP酶活性 ρ因子识别RNA转录物中富含C的识别位点 ρ因子结合，快速沿5’ →3‘方向移动， RNA聚合酶遇到终止子的发夹结构，暂停转录； ρ因子快速追上RNA聚合酶 ρ因子催化RNA转录物与模板链解旋 RNA转录物释放 非依赖 ρ因子的转录终止（强终止子） 抗终止因子 有些终止子的作用可被特异的因子所阻止，使RNA聚合酶得以越过终止子继续转录，这种现象成为通读(readthrough)；这类引起抗终止作用的蛋白质称为抗终止因子； RNA聚合酶催化的转录过程 1. 识别阶段 （1）RNA聚合酶在σ亚基引导下结合到启动子上，形成起始复合物α2ββ′σ（-35区） （2）DNA双链局部解开（-10区） 2. 起始阶段：在模板链上，碱基配对合成最初的RNA链 3. 延伸阶段：核心酶向前移动，RNA链不断生长，延伸产生了约10bp后，σ亚基解离 4. 终止阶段 （1）RNA聚合酶到达基因转录终点，形成终止复合物α2ββ′NusA （2）RNA和RNA聚合酶从DNA上脱落 转录起始的负调控 一. 乳糖操纵子 Lac操纵子由两个转录单元组成 P-O-lacZ-lacY-lacA Pi-I 诱导物 乳糖的代谢产物1,6-别乳糖 异丙基硫代半乳糖苷IPTG 2.乳糖操纵子的正调控 分解代谢物抑制 优先利用葡萄糖 Lac操纵子的表达被葡萄糖抑制 现象→问题？ 现象：Charles Yanofsky等发现trp操纵子的trpO与trpE间一段序列缺失突变使trp操纵子的表达提高6倍，且与阻遏无关。 问题：是否存在第二种调控机制？ Charles Yanofsky提出弱化作用（attenuation）的调控机制，即在trp丰富时提前终止trp操纵子的转录。 本章重点 掌握模板链、编码链、不对称转录的概念。 掌握断裂基因、外显子，内含子概念。 熟悉真核生物，mRNA、tRNA及rRNA转录后加工的主要方式。 转录终止的方式 思考题 1、名词解释 不对称转录 编码链 模板链 断裂基因 外显子 内含子 2、下列关于复制和转录的描述哪项是错误的？ A.在体内只有一条DNA链转录。而两条DNA链都复制 B.在这两个过程中合成方向都是5′→3′ C.两过程均需要RNA为引物 D.复制产物在通常情况下大于转录产物 3、下列哪一种反应不属于转录后修饰？ A. 腺苷酸聚合 B. exon剪除 C. 5′端加帽子 D. 内含子剪除 E. 甲基化 4、为什么说mRNA是结构基因的转录产物？其余DNA结构作何用？ 5、真核生物mRNA转录后加工