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毛细管 双电层 电泳与电渗 2014年10月29日 毛细管电泳的原理、特点及应用 汇报人： 邵云龙 S201405002 主要内容 影响分离效率的因素 毛细管电泳特点及应用 毛细管电泳历史发展 致谢 毛细管电泳基础理论 ◆ 1930年，Tiselins(瑞典)将蛋白质混合液放在两段缓冲溶液之间，两端施以电压进行自由溶液电泳，第一次将人血清提取的蛋白质混合液分离出白蛋白和α、β、γ球蛋白；发现样品的迁移速度和方向由其电荷和淌度决定； 1948年，获诺贝尔化学奖； 毛细管电泳历史发展 经典电泳分析 traditional electrophoresis ◆利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳； 按载体分类：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、自由电泳； 传统电泳分析：操作烦琐，分离效率低，定量困难，无法与其他分析相比。 ◆ 1981年，Jorgenson和Luckas，用75μm内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，后经不断发展完善，迅速成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——（高效）毛细管电泳（HPCE）。 高效毛细管电泳 high performance capillary electrophoresis 高效毛细管电泳在技术上采取了两项重要改进： 一是采用了0.05mm内径的毛细管柱； 二是采用了高达数千伏的电压。 毛细管的采用使产生的热量能够较快散发，大大减小了温度效应，使电场电压可以很高。 电压升高，电场推动力大，又可进一步使柱径变小，柱长增加， 高效毛细管电泳的柱效远高于高效液相色谱（一般HPLC柱的N在1000以上），理论塔板数高达几十万块/米，特殊柱子可以达到数百万。 毛细管电泳与HPLC的比较 高效毛细管电泳的特点 1.仪器简单、易自动化 电源、毛细管、检测器、溶液瓶 2.分析速度快、分离效率高 在3.1min内分离36种无机及有机阴离子，4.1min内分离了24种阳离子；分离柱效：105～107/m理论塔板数； 3.操作方便、消耗少 进样量极少，进样量 1～10 nL 样品量 5ul～5 mL，水介质中进行； 4.应用范围极广 有机物、无机物、生物、中性分子；生物大分子等； 分子生物学、医学、药学、化学、环境保护、材料等； 高效毛细管电泳的应用 手性化合物 1 碱性药物分子 2 法医毒物/临床毒理 3 蛋白质/多肽/氨基酸 4 糖类/糖蛋白 5 核酸/核苷酸 6 无机及有机离子/有机酸 7 水溶液中分子间的相互作用 8 单细胞分析 9 药物与细胞的相互作用 10 接触 解离 定域电荷 吸附离子 双电层 Zeta电势 备注： pH＞3 Si-O-H Si-O- 备注：V电渗是V电泳的5-7倍 （1）可一次完成阳离子、阴离子、中性粒子的分离； （2）改变电渗流的大小和方向可改变分离效率和选择性，如同改变LC中的流速； （3）电渗流的微小变化影响结果的重现性； 在HPCE中，控制电渗流非常重要 电渗流的方向 ◆电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： 内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； 内表面带正电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极； 石英毛细管；带负电荷，电渗流流向阴极； 改变电渗流方向的方法： （1）毛细管改性 表面键合阳离子基团； （2）加电渗流反转剂 内充液中加入大量的阳离子表面活性剂，将使石英毛细管壁带正电荷，溶液表面带负电荷。电渗流流向阳极。 电渗流的大小 ◆电渗流的大小用电渗流速度uos表示，取决于电渗淌度μos和电场强度E。即 uos = μos E 电渗淌度取决于电泳介质及双电层的Zeta电势，即 μos = ε0εξ ε0—真空介电常数；ε—介电常数；ξ—毛细管壁的Zeta电势。 HPCE中影响电渗流的因素 1.电场强度的影响 uos = μos E (E = U / d) uos ∝ U 2.毛细管材料的影响 不同材料毛细管的表面电荷特性不同，产生的电渗流大小不同； 3、 电解质溶液性质的影响 （1）溶液pH的影响 对于石英毛细管，溶液pH增高时，表面电离多，电荷密度增加，管壁zeta电势增大，电渗流增大，pH=7，达到最大； pH3，完全被氢离子中和，表面电中性，电渗流为零。分析时，采用缓冲溶液来保持pH稳定。 （2）溶液中离