光敏物质抗肿瘤的发现研究-ma牛nuscript.docxVIP

PAGE \* MERGEFORMAT1 基于热休克蛋白70的 光动力学抗肿瘤物质模型的构建 张峰，张玉城，赵鹏 刘建文 教授 摘要：光动力疗法是当前国际上正在发展的一种新技术，它是利用光敏剂的光动力反应产生细胞毒素，作用于靶组织，并产生组织效应的治疗方法。如今光敏药物逐渐成为各大研究机构的研究热点，在未来的肿瘤治疗中发挥着不可替代的作用。本课题通过对金丝桃素介导PDT肿瘤细胞的细胞毒性评价以及对于MCF-7细胞中热休克蛋白表达上调的影响来阐明光敏药物的作用细胞分子生物学机理。 关键词：光敏药物，金丝桃素，抗肿瘤，药物筛选 一、背景介绍 1光敏药物与PTD 目前已有4种光敏药物获得美国食品与药品监督管理局（FDA）的批准，即PHOTOFRINR（通用名porfimer sodium）、Visudyne（通用名verteporfin，或化学结构简称BPD-MA）和5-氨基酮戊酸（5-aminolaevulinic acid，ALA）和fosca。迄今为止，PHOTOFRINR是已获得美国FDA批准可应用于多种实体恶性肿瘤治疗的唯一的光敏药物。光敏剂的研究已获得很大的进展，在第一代光敏剂的基础上，相继开发了第二、三代光敏剂，且有的已进入临床研究阶段。第一代光敏剂主要是血卟啉衍生物，第二代主要是5-ALA（5-氨基酮戊酸），第三代是与各种物质交联的N-天门冬酰基二氢卟酚（Npe6）和酞青类，尚处在动物研究阶段。福州大学最新研制的光敏剂“福大赛因”就是酞青类化合物，具有组成确定结构明确、性质稳定、药剂量少、暗毒性低、用药后无需严格避光等优点，2008年6月，获得国家食品药品监督管理局批准进行临床试验。 PDT以其有效、安全、副作用小、可协同性、重复性和相对成本低等优点脱颖而出，并且在肿瘤的治疗中显示出很强的生命力，为中晚期癌症患者，特别是无法(或拒绝)采用传统疗法治疗的癌症患者提供了—个机会，增加了一种治疗手段。迄今为止已有数干例的洽宁报道，治疗的范围包括：脑瘤、咽癌、肺癌、胸壁肿瘤、食管癌、直肠癌、腹腔肉瘤、膀胱癌、乳腺癌和妇科肿瘤等。 1.2.光敏药物抗肿瘤的机制 光敏药物经注射进入人体以后，很快会在不同的组织中形成不同的浓度分布，然后又以不同的速率下降，并在数天后大部分排出体外。摄取了药物的人体组织，如果没有受到光的照射就不会引发光动力反应，产生细胞毒。具体的说PDT抗肿瘤的活性机制主要是将破坏肿瘤血管、诱导肿瘤细胞凋亡和免疫应答相结合共同直接作用于肿瘤。 1.2.1光敏药物的定位和靶区 光敏药物一旦接受特定波长的光照就会在分子氧的参与下发生光化学反应，产生化学性质非常活泼的单态氧及氧自由基。它们可以氧化多种生物大分子而破坏肿瘤细胞的膜结构、DNA以及其他的细胞器结构。光敏药物主要分布于胞浆内，通常位于浆膜、线粒体、溶酶体。如在PDT结肠癌细胞，超微结构变化为：胞膜光滑，胞浆空泡，线粒体肿胀，内质网破坏，胞浆明显髓梢样变。 在细胞生物大分子中，随光敏感的主要有蛋白质、酶、核酸等生物大分子及其组成成分氨基酸和碱基等，其中作用最敏感的部位是蛋白质中的二硫键、核酸中的鸟嘌呤，氨基酸中的色氨酸、酪氨酸、组氨酸、蛋氨酸和半胱氨酸等，也有研究表明光动力作用的靶区是细胞膜中的脂蛋白。因此大多数光敏药物是亲油性的化合物，难溶于水，往往制成乳剂或脂质体制剂，以增加靶向性。如很多肿瘤细胞的低密度脂蛋白的受体要比周围的正常组织多得多，就可以把低密度脂蛋白一光敏药物复合物通过受体介导的胞吞作用进入细胞。当然，我们期待光敏剂的最好靶区域是细胞核，从根本上给癌细胞以致命一击。 1.2.2光敏药物的作用机理 （1）直接杀死细胞 PDT的初级反应是光敏化反应，它的次级反应多属生物化学反应的范畴随后发生的是一系列生物学效应。光敏分子与光相互作用引发光动力效应，是光敏分子由基态转变为激发态，释放出中性自由基或离子化的活性基团（如高活性单态氧）， 造成肿瘤局部血管内皮的损伤及血管组织的坏死， 破坏肿瘤细胞的血供，最终导致肿瘤的坏死和肿瘤生长的停止。有研究发现利用有抗血管活性的药物作为光敏，特异性的结合血管内皮细胞，通过光动力作用，比以肿瘤细胞为靶向的 P D T造成更大面积的组织损伤。（2）诱导细胞凋亡 光敏剂诱导的凋亡作用于线粒体、溶酶体等，使之破裂，释放出细胞色素C、凋亡诱导因子、Ca2+以及膜间隙中的其它凋亡因子，激活凋亡蛋白家族的主要成员caspases，或独立破坏核内染色质，或作用于其它Ca2+依赖性蛋白，或抑制Bcl-2活性或激活P53蛋白，从而是整个细胞结构破坏，功能紊乱，最终变成泡状凋亡小体而凋亡。用维拉帕米 (Verapamil，Ver)增效PDT，癌细胞结构变化为：胞膜破裂，胞浆内较多巨大空泡，线