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结核病的分子诊断技术进展
应斌武
四川大学华西医院
2017.12 广西南宁
01 结核的流行现状
02 结核的分子生物学诊断
03 诊断技术发展的多元化
04 华西医院的结核病诊断
的临床应用与研究进展
一、结核流行病学现状
预计未来20年将有3600万人死于结核病,
结核病为感染性疾病中的头号杀手。
传统检测方法
特点:操作简便、快速、价廉。特异
性好,阳性率低,易造成漏诊。
涂片
特点:提高了镜检的灵敏度,缩短了检
测时间;缺点是假阳性率较高,需确证
方法(萋-纳染色)
Sputum
固体培养及药敏试验—孵育4
周观察生长情况
平均时间2-3个月
培养
液体培养及药敏试验
平均时间20天
数小时,快速简便,
分子生物学 相对传统方法更灵敏
二、结核的分子生物学诊断
分子诊断
RNA 水平 DNA 水平 蛋白质水平
恒温扩增 变温扩增 IGRA, TST 等
扩 增 杂 交
SAT,TMA FISH, 探针 鉴 定 鉴定+耐药
LAMP, RT-PCR,
SDA LPA, Xpert,
HRM, 测序
RNA作为分子诊断靶标的技术
1. Gen Probe MTD (TMA技术)
原理:以rRNA为靶标 ,采用线性探针技术检测
结核分枝杆菌复合群
检测时间: 2.5h
扩增 rRNA ,TMA恒温扩增
动力快速反应,30分钟产生十亿扩增物
反应在单一试管进行,无须移液和清洗
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