需氧革兰阳性杆上菌及检验.pptVIP

需氧革兰阳性杆菌及检验 华中科技大学同济医学院附属协和医院 熊 艳 革兰阳性杆菌菌属间的鉴别 第一节 棒状杆菌属 棒状杆菌属的共同特征 革兰阳性多形态杆菌 无荚膜、无鞭毛、无芽胞 细菌呈不规则栅栏状排列 需氧或兼性厌氧 触酶试验阳性 细胞壁结构和血清学分析，证实与分枝杆菌属、奴卡氏菌属有共同的成分。 一．白喉棒状杆菌 （一）生物学特性 形态与染色 培养特性 菌落特征 生化反应 抗原构造 抵抗力 形态与染色 细长弯曲、一端或两端膨大的革兰阳性杆菌。无荚膜、无芽胞、无鞭毛、无菌毛。细菌排列呈散在L、V、Y字形及不规则栅栏状。 培养特性 需氧或兼性厌氧，生长温度为15–40℃，最适生长温度为35–37℃，pH7.2–7.8。 菌落特征 血平板：灰白、狭窄β溶血环。 鸡蛋斜面和血清斜面：生长迅速，灰白色有光泽菌落。 亚碲酸钾血平板：为选择培养基，菌落呈黑色。菌落分为重型、轻型或中间型。 生化反应 触酶（+），氧化酶（-） 能分解葡萄糖、麦芽糖、果糖等，产酸不产气。 不分解乳糖、多数不分解蔗糖。 靛基质试验－、明胶液化－、尿素分解－ 抗原构造 菌体O抗原：与分枝杆菌、奴卡菌有共同抗原。 K抗原：型特异性抗原，不耐热。 抵抗力 对湿热和一般消毒剂敏感。 对冷和干燥有一定抵抗力。 （二）致病性 致病物质：白喉外毒素 由携带β-棒状杆菌噬菌体的白喉杆菌产生。 作用机制：抑制细胞内蛋白质的合成。 经呼吸道飞沫传播，引起白喉。 假膜脱落阻塞呼吸道是白喉早期死亡的主要原因。 中毒性心肌炎是白喉晚期死亡的主要原因。 （三）免疫性 抗白喉免疫主要依靠白喉抗毒素的中和作用。 成人绝大多数具有免疫性，主要由于隐性感染所获得的免疫力。 锡克试验用于检测机体有无白喉抗毒素抗体存在。 （四）微生物学检验 标本采集 检验程序 检验方法 生化反应 毒力试验 标本采集 用无菌长棉拭子，从疑为假膜的边缘采集分泌物。 未见假膜的疑似患者或带菌者可采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物。 检验程序 检验方法 标本直接涂片 革兰染色：观察形态、染色性 异染颗粒染色：观察异染颗粒 初步报告：检出形似白喉棒状杆菌 分离培养 吕氏斜面：生长迅速，涂片镜检异染颗粒明显 亚碲酸钾血平板：黑色菌落 生化反应 根据糖发酵是否产酸可鉴别棒状杆菌中的不同种。 白喉棒状杆菌发酵葡萄糖、麦芽糖产酸，不分解蔗糖；尿素酶（–）、硝酸盐还原试验（+）等可用于与其他棒状杆菌的鉴别。 毒力试验 意义：是鉴定白喉杆菌为致病菌株的重要依据 方法 艾立克平板毒力试验 对流电泳法 协同凝集试验 动物实验 二．其他棒状杆菌 第二节 需氧芽胞杆菌属 芽胞杆菌属共同特点 绝大多数菌种在有氧条件下形成不大于菌体横径的芽胞 除炭疽芽胞杆菌外均有动力和溶血能力 非抗酸性 营养要求不高，在普通培养基上生长良好 一．炭疽芽胞杆菌 （一）生物学特性 形态与染色 培养特性 菌落特征 生化反应 抗原构造 抵抗力 形态与染色 为致病菌中最大的革兰阳性杆菌，两端齐平或凹陷，呈竹节状，单个或呈短链状排列。 无鞭毛，形成芽胞，有毒菌株可形成荚膜。 培养特性 需氧或兼性厌氧。 营养要求不高，普通培养基上生长良好。 菌落特征 普通琼脂平板：菌落扁平、粗糙，不透明灰白色，无光泽，边缘不整齐，在低倍镜下可见到菌落边缘呈卷发状。 血液琼脂平板：培养12～15h，菌落周围无溶血环，18～24h后可有轻微溶血，而其他需氧芽胞杆菌大多数溶血明显而快速。 液体培养基中呈絮状生长 明胶培养基中呈倒置的杉树 有毒株在NaHCO3培养基中形成荚膜，菌落呈粘液状，有拉丝。 生化反应 分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不产气。不分解乳糖。触酶（+），VP（–），吲哚（–），尿素（–） 。 抗原结构 炭疽毒素：由保护性抗原、致死因子、水肿因子组成的蛋白质复合物，后两者单独不能发挥生物活性作用，都必须与保护性抗原组合才能引起实验动物的水肿致死。具有抗吞噬作用和免疫原性，故患炭疽后有免疫力。 荚膜抗原：与细菌毒力有关，失去荚膜后毒力也就消失。该抗原具有高度特异性，在临床诊断中有鉴别诊断价值。 菌体抗原：耐热、耐腐败，无毒性，有种特异性。 芽胞抗原：芽胞的外膜含有抗原决定簇，与皮质层一起组成炭疽芽胞杆菌芽胞的特异性抗原，此抗原具有免疫原性和血清学诊断价值。 抵抗力 本菌繁殖体抵抗力与其它细菌相同，芽胞抵抗力很强。在干