基于样方数据的云南松林分生长模型研究.PDF

植物学报 Chinese Bulletin of Botany 2016, 51 (3): 363–368, doi: 10.11983/CBB15102 ·技术方法 · 五寸石竹毛状根诱导及其植株再生 * 施和平, 王蓓, 杨树楠, 郭亚鹏 华南师范大学生命科学学院, 广东省植物发育生物工程重点实验室, 广州 510631 摘要 建立了五寸石竹(Dianthus chinensis)毛状根诱导及其植株再生体系。用含野生农杆碱型Ri质粒的发根农杆菌 (Agrobacterium rhizogenes) 15834感染五寸石竹叶片外植体10天后, 从其形态学下端产生白色不定根; 30天后, 叶片外植 体的生根率为95%; 所产生的毛状根能在无外源生长调节剂的固体和液体MS培养基上快速自主生长。遗传转化鉴定结果表 明, 发根农杆菌Ri质粒的生根基因(rol) 已在毛状根基因组中整合并表达。五寸石竹毛状根的根段在成分为MS+2.0 mg·L–1 6-BA+0.2 mg·L–1 NAA 的培养基中培养15天后产生浅绿色疏松愈伤组织; 将愈伤组织转入成分为MS+1.0 mg·L–1 6- BA+0.02 mg·L–1 NAA 的培养基中培养30天后逐渐形成不定芽。盆栽的五寸石竹毛状根再生植株与非转化植株(对照)相比节 间缩短, 开花期提前18天。 关键词 五寸石竹, 毛状根, 植株再生, 提早开花 施和平, 王蓓, 杨树楠, 郭亚鹏 (2016). 五寸石竹毛状根诱导及其植株再生. 植物学报 51, 363–368. 毛状根(hairy roots)是发根农杆菌(Agrobacter- 再生的结果, 旨在为今后从五寸石竹毛状根再生植株 ium rhizogenes)感染植物细胞后, 其Ri质粒含rol基 中筛选出花色变异的新品种, 并为利用该毛状根的同 因(生根基因)的T-DNA片段在植物细胞核基因组中插 源多倍体化创新其种质奠定实验和技术基础。 入、整合和表达所产生的(Tepfer and Casse-Delbart, 1987)。它不仅具有单细胞起源、遗传稳定和可在无 1 植物材料 外源激素培养基上自主生长的特性, 以及表现出相当 或远高于原植株次生代谢物合成能力的优势(Giri 1.1 细菌菌株及培养 and Narasu, 2000; 吴晓凤等, 2008); 而且容易通过 感染实验用的菌株为含野生农杆碱型Ri质粒的发根 组织培养技术获得再生植株(Choi et al., 2004; Shi et 农杆菌(Agrobacterium rhizogenes) ATCC15834 ( 由 al., 2011; 施和平等, 2014), 且其再生植株通常还具 德国马丁·路德大学Peter Lindemann博士馈赠)。感染 有诸如矮化(Godo et al., 1997)、顶端优势减弱(侯丽 前, 挑取该农杆菌单菌落, 接种于添加20 μmol·L–1 乙 丽等, 2014)、花序缩短、花叶形态改变(Christensen 酰丁香酮的YEB液体培养基中, 28°C振荡(每分钟160 et al., 2008)或提早开花(Koike et al., 2003)等观赏性 转)活化培养30小时后, 待用。 状的改变, 表明利用毛状根的多态性可进行植物尤其 是园艺植物种质创新或观赏性状改良的研究。五寸石 1.2 无菌苗及其外植体的制备 竹(Dianthus chinensis), 别名矮石竹, 锦团石竹, 是 五寸石竹(Dianthus chinensis L.)种子购自北京市芳 石竹科多年生草本植物, 目前在园林绿化中广泛应 萱苑种子有限公司。将种子用清水浸泡2–3小时后, 用。但截至目前尚未见有关其种质创新或利用发根农 在超净工作台上用75% 乙醇和0.1%HgCl2 溶液常规 杆菌对其遗传转化