生物分离工程细胞分离与胞内产物溶解.pptVIP

* 外源蛋白在大肠杆菌中的积累 蛋白 产物占菌体总蛋白 外源蛋白的积累 人胰岛素 50% 形成包涵体 β -丙酰胺酶 20% 在细胞间区 γ-人体干扰素 25% 形成包涵体 凝乳酶原 形成包涵体 牛生长激素 30% 形成包涵体 β -内酰胺酶 形成间区包涵体 人胰岛素原 5%~26% 形成包涵体 * 包涵体：一种蛋白质不溶性聚集体，包括目标蛋白、菌体蛋白等。目标蛋白一级结构是正确的，但立体结构是错误的，所以没有生物活性。 包涵体的形成：大肠杆菌中目标产物的表达水平过高，超过正常代谢水平，过多表达产物聚集在细胞内，形成不溶性的包涵体。 高表达产生的积聚物在细胞内部形成不溶物原因？ 蛋白过量积聚，超过溶解度，导致沉淀； ②蛋白生成太快，分子间疏水基团相互作用而聚集沉淀； ③蛋白生成太快，分子内部二硫键的错误连接导致沉淀； ④表达蛋白过多，与其结合/诱导组分不足，不能形成溶解状态 ⑤ 蛋白质自身不稳定。 包含体的构成 * 基因工程包涵体的纯化方法 收集菌体细胞 细胞破碎 包涵体的洗涤 目标蛋白的变性溶解 目标蛋白的复性 包含体的出现不仅增加了生物分离设计的难度，也为蛋白质折叠机理研究提出了新的课题。 欲获得天然活性态的目标产物，必需分离包含体后，溶解包含体并使其中的目标蛋白恢复应有的天然活性。 * 包涵体获得几种常见的工艺路线(一) 机械破碎 (高压匀浆、高速珠磨） 离心提取包含体 加