GB/T 25168-2010畜禽cDNA文库构建与保存技术规程.pdf

ICS65．020．30 B40 雷目 中华人民共和国国家标准 GB／T of animals and Technical farm cDNA construction regulation library 2010-09-26发布 宰瞀髁紫瓣訾糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会促19 25168—2010 GB／T 刖 菁 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国畜牧业标准化技术委员会(SAC／TC274)归口。 本标准起草单位：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所。 本标准主要起草人：马月辉、关伟军、陆涛峰、李向臣、佟春玲、余露露、刘鹏。 GB／T25168—2010 畜禽eDNA文库构建与保存技术规程 1范围 本标准规定了畜禽cDNA文库构建方法。 本标准适用于猪、牛、羊、马、驴、鸡、鸭、鹅等畜禽cDNA文库构建与保存。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3．1 eDNA acid complementarydeoxyribonucleic 以成熟mRNA为模板，在反转录酶的作用下合成的eDNA链。 3．2 eDNA eDNA文库 library 将处于特定发育阶段真核生物体的特定器官或组织中提取的总RNA，经过反转录等一系列的生化 反应合成双链cDNA群体后，再插入到适当的载体上，经转化寄主菌株构成特定的eDNA克隆群体。 3．3 寡核苷酸oligonueleotide 一类只有20个以下碱基对的短链核苷酸的总称，常用作探针确定DNA或RNA的结构。 3．4 噬菌斑plaque 被噬菌体感染的细菌所释放的子代噬菌体，会继续感染周围的细胞，致使在琼脂平板上生长的菌苔 中有大量的细胞发生裂解，形成的透明区域。 4试剂及溶液配制 除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB／T6682一级用水的要求。 4．1焦碳酸二乙酯(diethypyrocarbonate，DEPC)处理水 000 mL 在1 mL去离子水中加人1 DEPC，37℃静置12h，高压灭菌(120℃30min)。 4．2 2mol／L MgSO, distilled 称取246．50gMgS04·H20，加400mL双蒸水(doubleH20，ddH20)溶解后，定容到 500 mL，高压灭菌。 4．3 TOmmol／LMgso． 量取1mL2mol／L rain。 MgS04加ddH20定容到200mL，高压灭菌，30 4．4 1 mol／LTris-Cl(p町．5)