生命科学导成论实验.pptVIP

生命科学导论实验一细胞形态结构观察及显微镜的使用 ;实验一 细胞形态结构观察和光学显微镜的使用 一. 实验目的 1.了解和掌握普通光学显微镜的的基本原理和操作规程。 2.了解细胞的基本形态结构。 3.通过比较不同细胞形态，了解正常肝细胞与脂肪肝细 胞的基本形态结构及区别。 二. 实验原理 细胞是生物体的基本结构单位。构成生物机体的细胞是多种多样的。要对细胞进行研究，首先要从其形态结构人手。所以，要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。 ;基础知识;2.荧光显微镜 ;3. 激光共聚焦扫描显微镜 ;4.暗视野显微镜 暗视野显微镜（dark field microscope）的聚光镜中央有当光片，使照明光线不直接进人物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜，因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。利用这种显微镜能见到小至 4-200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 5.相差显微镜 ;6. 偏光显微镜 偏光显微镜（polarizing microscope）用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。 7.微分干涉差显微镜 DIC显微镜其优点是能显示结构的三维立体投影影像。与相差显微镜相比，其标本可略厚一点，折射率差别更大，故影像的立体感更强。 ;;9. 透射电子显微镜 ;内质网透射电镜图（伪彩色） ;10. 扫描电子显微镜 ;11. 显微操作技术 ; 在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表： 物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10× 0.25 5.40 40× 0.65 0.39 100× 1.30 0.11 显微镜的总放大倍数等于目镜和物镜放大倍数的乘积， 公式为: M = K1xK2 焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时，不仅是这一物点，而且它的 上下两侧也能看清楚两侧的厚度叫做焦点深度。看到标本的全 厚度，必须调节螺旋仔细地从上到下进行观察。;;瞳 距 调 节;屈 光 度 调 节;粗 调 松 紧 调 节 旋 钮;聚 光 镜 中 心 调 节;3. 观察操作： (1) 低、高倍镜的使用: 先把低倍的物镜用粗调焦螺旋下降至离盖玻片0.5cm处，然后一边观察视野一边上升物镜，直至看到图像，再将标本移到视野中心，用细调焦螺旋把物镜调至最清晰处，若要用高倍镜观察时，把所要进一步放大观察的部位移至视野中央，直接顺时针转换成高倍物镜，然后用细调焦螺旋调焦，至看清物像。 ;(2) 兔肝细胞苏木精-伊红(H·E·)染色玻片标本的观察 先在干燥系物镜下观察肝小叶的概况，辨认肝细胞，然后用油镜仔细观察肝细胞的显微结构。注意肝细胞的形状，细胞核和核仁的形状和数量，细胞核和细胞质的染色区别等。;(3)脂肪肝细胞标本观察;正常肝脏肝小叶 1.中央静脉 2.肝细胞索 3.肝血窦 ; 肝细胞脂肪变性 1.肝细胞胞浆内出现大小不等的脂肪空泡； 2.右上角为饿酸染色的脂肪细胞,脂滴染成 黑色。 ; 肝脂肪变轻者，由于肝脏有很强的代偿能力，一般不出现肝功障碍。但长期肝脂肪变可能引起肝纤维组织增生，甚至肝硬化。严重弥漫性肝脂肪变亦可引起肝功障碍，如妊娠高血压综合征发生严重肝脂肪变，临床称为脂肪肝，患者可能出现肝昏迷而死亡。 引起肝脂肪变的原因很多，如氯仿、四氯化碳、磷等化学毒物中毒，妊娠中毒、酒精中毒、馒性肝淤血、肥胖病、糖尿病、漫性消耗性疾病等。常见脂肪肝的病理类型及其病理变化为：1.酒糟性脂肪肝 此型脂肪肝由嗜酒引起，嗜酒时间及饮酒量与随后发生的肝损伤之问井无严格的平行关系。每天饮用酒精60g以上者均会出现脂肪肝，但在戒酒后几周内可完全恢复。但是，如果每天饮用酒精超过160g，则可出现脂肪肝炎。 ;2.毒性脂肪肝???? 本病系化学物质（毒物或药物）引起的肝损伤。有些物质本身或其代谢产物可通过物理化学途径直接损伤肝细胞，称为直接的绝对肝毒素。属于此类的有四氯化碳、氯仿、磷等。有些物质不是通过毒物本身损伤肝细胞，而只是使一定的物质代谢过程失常，造成肝细胞脂肪变或坏死，称为间接的绝对肝毒素。此类毒物主要为药物，如细胞抑制剂（抗代谢药物）、抗生素（四环素）、镇痛剂（扑