第7章_体液蛋白质检验..ppt

二、血浆蛋白质测定方法及评价 化学法凯氏定氮法（参考方法） 是测定蛋白质的经典方法，1883 年Kjeldahl首创，精密度准确度 高，但操作复杂、费时、技术性 强，不适合临床常规检测，一般 用于标准血清的标定和校正。 实验目的 熟悉血清蛋白的测定方法（双缩脲法） 掌握血清总蛋白测定的临床意义 进一步巩固掌握721型分光光度计的使用 实验原理 蛋白质中的肽键（-CONH-）在碱性溶液中能与Cu2+作用而产生紫红色络合物，其颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比，而与蛋白质的分子量及氨基酸成分无关。 双缩脲反应并非是蛋白质特有的颜色反映！ 凡分子内含有2个或2个以上甲酰基氨基（- CONH2-）均可呈双缩脲反映。 实验操作 取3支试管，按下表操作 混匀，37℃水浴放置10分钟，以空白管调零点，在540nm波长 处进行比色，分别读取各管的吸光度。 计算 测定管吸光度 血清总蛋白（g/L）=---------------------*蛋白质标准液浓度（g/L） 标准管吸光度 标准曲线 1.配制20g/L蛋白标准液 2.取试管6支，标记后，按下表操作 血清蛋白质标准曲线绘制操作步骤 注意事项： 1.血清标本以新鲜为宜，含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现 混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行比色 2.蛋白标准液要澄清，如果浑浊应更换，否则需作标准空白管，以消除 浊度的影响。 3.试管，刻度吸管应清洁，否则会有浑浊出现。 4.高脂，黄疸及溶血标本应作清空白对照来校正误差。 5.铵离子能与氢氧化铜反应，因此，实验所用器材不可含铵盐。 实验操作 取3支试管，按下表操作 混匀，放置10分钟，以空白管调零点，在630nm波长处进行比 色，分别读取各管的吸光度。 计算 测定管吸光度 血清清蛋白（g/L）=------------------ *清蛋白标准液浓度（g/L） 标准管吸光度 血清球蛋白g/L=血清总蛋白g/L-血清清蛋白g/L 参考范围 血清清蛋白 35-55g/L 血清球蛋白 20-29g/L 2.临床意义 血清清蛋白 （1）清蛋白浓度增高： 除严重脱水，血浆浓缩而使清蛋白增高外，尚未发现单 纯清蛋白浓度增高的疾病。 （2）清蛋白浓度降低：同总蛋白浓度降低。 1. 血液稀释 静脉滴注过多低渗溶液，各种原因所引起的水钠潴。 2. 摄入不足和消耗增加 营养不良，慢性胃肠道疾病引起的消化吸收不良，消耗性疾病，结核 病、甲亢、恶性肿瘤。 3. 合成障碍 主要见于肝脏疾患。 4. 蛋白质丢失 严重烧伤，大量血浆渗出，肾病综合症。 血清球蛋白 球蛋白的含量是通过血清总蛋白测定值减去血清清蛋白测值计算出的。 临床意义 球蛋白浓度增高：临床上球蛋白增高多见于炎症、免疫系统疾病和肿瘤 1）细菌、病毒、寄生虫引起的急慢性感染：结核病、麻风病、疟疾、黑热病、血吸虫病、病毒性肝炎。 2）自身免疫性疾病：系统性红斑狼疮、硬皮病、风湿热、类风湿性关节炎等。 3）多发性骨髓瘤和淋巴瘤：多发性骨髓瘤是一种单克隆疾病，它是由浆细胞恶性增殖造成的异常高的单一Ig（多见于IgA或IgG）血症。淋巴瘤也属单克隆疾病。 球蛋白浓度降低：见于血液稀释、严重的营养不良、胃肠道疾病等。 白蛋白与球蛋白的比例 A／G比值反映了清蛋白与球蛋白浓度变化的关系。正常A／G 比值为1～2／1.临床上常用A／G比值来衡量肝脏疾病的严重 程度，当A／G比值小于1时，称比值倒置，为慢性肝炎或肝 硬化的特征之一。 注意事项 1、标本要新鲜，放置过久会使结果偏低。 2、纤维蛋白凝块要完全卷起。 3、不能溶血，否则结果增高。 4、卷、挤、吸、洗、溶的过程要轻柔，避免纤维蛋白丢失。 测定管吸光度 0.01 血清总蛋白（g/L）=----------------*标准蛋白质浓度（g/L）*---- 标准管吸光度 0.5 参考范围 2-4g/L 二、热沉淀比浊法? 原理?? 血浆经??pH6.3??KH2PO4-NaOH缓冲液稀释后，加热至56℃， 使纤维蛋白原凝集而呈现浊度，而其它蛋白质仍处于溶解状