临床医学五年制 实验诊断学课件.pptVIP

* . 精选 * . 精选 临床医学五年制 实验诊断学 续 薇 教 授 博士生导师 * 第二节 溶血性贫血的实验室检测 * 概 述 定义:是由于各种原因使红细胞生存时间缩短、红细胞破坏加快、红细胞破坏增多，超过骨髓的代偿造血能力时所发生的一类贫血。 溶血性疾病：骨髓造血功能能够代偿红细胞破坏。 * 按部位分类： 血管内溶血-红细胞破坏在血液中 血管外溶血-红细胞破坏在单核巨噬 细胞系统 原位溶血 - 红细胞破坏在骨髓中 * 按原因分类： 膜缺陷 酶缺陷 血红蛋白缺陷 免疫因素 物理因素 化学因素 感染因素 脾功能亢进 内在因素 外在因素 * 一、溶血性贫血的筛查检测 （一）血浆游离血红蛋白检测 （二）血清结合珠蛋白检测 （三）血浆高铁血红素清蛋白检测 （四）含铁血黄素尿试验(Rous试验) （五）红细胞寿命测定 * 原 理 大量Hb游离在血浆中 大量Hb 小分子肾阈值 与珠蛋白结合后被运输到肝脏分解 一部分Hb转变为高铁Hb＋白蛋白 Hb被肾小管上皮细胞重吸收 Hb在血浆中游离 红细胞破坏 2、血红蛋白尿 高Hb血症 4、高铁血红素白蛋白（+） 3、血浆中结合珠蛋白（减低） 1、血浆游离Hb测定(增高） 在细胞内代谢成含铁血黄素 6、血结素减低 结合珠蛋白耗尽时剩余的Hb与血结素结合 5、尿含铁血黄素试验(+) 随细胞脱落至尿中，铁染色（＋） * 二、红细胞膜缺陷的检测 （一）红细胞渗透脆性试验（EOFT）—初筛试验 原理： 红细胞置于等渗盐水中，膜不破坏。红细胞置于 不同浓度NaCl溶液中，水分通过细胞膜进入细胞内,红细胞膨胀至破裂而溶血。不同浓度时，红细胞膜对低渗溶液的抵抗力不同，破坏程度不同。 * 试管号 浓度差 0.54 0.52 0.50 0.48 0.46 0.44 0.42 0.40 0.38 0.36 0.34 0.32 0.30 0.28 0.26 0.24 0.22 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 开始溶血 完全溶血 意义： 红细胞对低渗盐水的抵抗力降低 →渗透脆性增高，如遗传球。 红细胞对低渗盐水的抵抗力增强 →渗透脆性减低，如HS、IDA。 * （二）自身溶血试验及纠正试验 参考值： 正常人红细胞孵育48h，轻微溶血、溶血度＜3.5%。 加葡萄糖和加ATP孵育，溶血纠正，溶血度＜1%。 临床意义：作为遗传球和先天性非球形细胞性溶贫的鉴别诊断。 纠正试验：加葡萄糖和ATP纠正： 1型 加葡萄糖不纠正、加ATP纠正：2型 * 三、红细胞酶缺陷的检测 (一)高铁血红蛋白还原试验（MRT）—筛选试验 原理： 在足量的NADPH存在下，高铁血红蛋白能被还原成亚铁血红蛋白。当G6PD含量正常时，由磷酸戊糖途径生成的NADPH的数量足以完成上述还原反应。如果G6PD缺乏，则高铁血红蛋白还原速度较正常人减慢。 参考值：正常人试验结果呈阴性（红色） G-6-PD缺陷症呈阳性 （棕色） * （二）氰化物-抗坏血酸试验 临床意义： 正常血液要在几小时后才变成暗色。 纯合子G6PD缺乏的血液变成棕色，在2h内 即变色， 杂合子要3-4h变色。 * （三）变性珠蛋白小体生成试验 临床意义： G6PD缺乏症，不稳定Hb、HbH病等＞45%。 * (四)G-6-PD荧光斑点试验和活性测定 ——确证试验 原理：红细胞中的G6PD催化G-6-P转化为6-磷酸葡萄糖酸时，使氧化型辅酶（NADP）生成还原型NADPH，NADPH在340nm处有一吸收峰，在紫外线激发下可产生荧光。 参考值：正常人有甚强荧光， 酶活性4.97±1.43U/gHb。 临床意义: G6PD缺乏者荧光很弱或无荧光。 * （五）丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定 原理：在ADP存在下，丙酮酸激酶催化烯醇式磷酸丙酮酸变为丙酮酸，在NADH存在下，丙酮酸被乳酸脱氢酶作用转变为乳酸，若荧光标记于N